本文關鍵詞：乙型腦炎病毒EⅢ基因片段的表達與EⅢ-間接ELISA抗體檢測試劑盒的研制

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【摘要】：為了研制乙型腦炎病毒EⅢ-間接ELISA抗體檢測試劑盒,將乙型腦炎病毒EⅢ基因克隆至原核表達載體p ET-32a(+),重組質粒轉化大腸桿菌BL21進行誘導表達。以純化后的重組蛋白EⅢ包被酶標板,優(yōu)化ELISA反應條件,組裝試劑盒。SDS-PAGE和Western bloting分析表明,重組蛋白分子質量約為30ku,經IPTG誘導后高效表達,且具有來良好的免疫原性。優(yōu)化試驗確定重組抗原最佳包被濃度為4.7μg/m L,血清樣本的陽性臨界值為0.255。特異性試驗結果表明,重組蛋白與豬瘟、豬偽狂犬、豬圓環(huán)病等多種病原體的陽性血清無交叉反應。敏感性試驗結果表明,血清稀釋至1∶6400時仍檢測為陽性。該試劑盒的批內、批間變異系數均小于10%。用該試劑盒檢測224份臨床豬血清樣本,并與商品化ELISA試劑盒檢測結果比較,兩者的符合率為90.7%。研究結果表明,原核表達的豬流行性乙型腦炎病毒EⅢ蛋白具有良好的免疫原性,研制的豬流行性乙型腦炎病毒EⅢ-間接ELISA抗體檢測試劑盒敏感性、特異性和重復性較好,為豬流行性乙型腦炎的抗體水平檢測、流行病學調查、類癥鑒別等方面提供了重要方法。
【作者單位】： 華南農業(yè)大學獸醫(yī)學院;
【關鍵詞】： 豬流行性乙型腦炎病毒 原核表達 間接ELISA
【基金】：廣東省科技計劃項目(2015B020230009,2015A050502044) 國家重點研發(fā)計劃重點專項(2016YFD0500700) 國家公益性行業(yè)(農業(yè))科研專項(201203056,201203082)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 流行性乙型腦炎(Epidemic encephalitis B)又稱日本腦炎(Japanese encephalitis,JE),簡稱乙腦,是一種人與動物共患的蚊媒病毒性疾病[1],對人類危害巨大。該病由黃病毒科黃病毒屬B組蟲媒病毒中嗜神經的乙型腦炎病毒(Japaneseencephalitis virus,JEV)引起。目前該病主要發(fā)生及流

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本文編號：964502