本文關鍵詞：豬四種病毒性腹瀉病原多重PCR檢測方法的建立及應用

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【摘要】：分別以豬流行性腹瀉病毒(PEDV)M基因、豬輪狀病毒(Po RV)VP6基因、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)N基因、豬源牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)Npro基因為靶基因,參照Gen Bank上登錄的基因序列,利用DNAStar和Oligo7軟件設計了4對引物。采用PCR分別擴增各病毒基因,并克隆至p MD18-T載體,獲得4個陽性重組質(zhì)粒。以重組質(zhì)粒為模板,進行多重PCR方法的優(yōu)化。特異性試驗檢測可分別擴增出相應的病毒基因片段;敏感性試驗結(jié)果顯示,檢測PEDV、TGEV、Po RV及BVDV質(zhì)粒的最低拷貝數(shù)分別為730copies/L、547 copies/L、6.47×103copies/L、705 copies/L。應用該方法對豬場44份豬腹瀉樣品進行檢測,結(jié)果檢出15份PEDV樣品,3份TGEV樣品,2份BVDV樣品,其中PEDV與TGEV混合感染樣品2份,TGEV與BVDV混合感染樣品1份。隨機抽取其中2份PEDV陽性樣品進行病毒分離,病毒經(jīng)細胞傳3代以上PCR檢測均為陽性,對PCR產(chǎn)物測序證實為PEDV。結(jié)果表明,本研究建立的多重PCR方法具有快速、簡便、特異性強、敏感度高的特點,能夠?qū)EDV、Po RV、TGEV和BVDV單個或混合感染的臨床樣品進行快速鑒別診斷。
【作者單位】： 上海市農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所;上海海洋大學水產(chǎn)與生命學院;上海市農(nóng)業(yè)遺傳育種重點實驗室;
【關鍵詞】： 豬病毒性腹瀉病原 多重PCR檢測技術 PEDV TGEV Po RV BVDV
【基金】：上海市農(nóng)委重點攻關項目[滬農(nóng)科攻字(2013)第5-5號,滬農(nóng)科攻字(2013)第3-6號] 上海市揚帆計劃項目(15YF1410300)
【分類號】：S858.28
【正文快照】： 豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(porcine trans-missible gastroenteritis virus,TGEV)、豬輪狀病毒(porcine rotavirus,Po RV)是引起豬病毒性腹瀉的重要病原,感染豬臨床表現(xiàn)為嚴重腹瀉、嘔吐及脫水,各年齡段豬都可感染,發(fā)病率高

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余麗蕓;趙志剛;侯喜林;曹宏偉;王桂華;;乳酸菌表面表達PEDV S1蛋白的研究[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學學報;2008年04期

2 高慎陽;劉延慶;李一經(jīng);;豬流行性腹瀉病毒(PEDV)M蛋白原核表達載體的構建[J];中國獸醫(yī)學報;2009年12期

3 古洪浪;鄧勝朝;崔進;劉曉露;劉超;袁航;馬嵐;張桂紅;;豬流行性腹瀉病毒PEDV-GD12株的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;2013年11期

4 杜曉莉;王一成;吳潤;徐麗華;袁秀芳;李軍星;周曉麗;;2010—2013年浙江省豬流行性腹瀉病毒臨床檢測及PEDV-S基因型分析[J];浙江農(nóng)業(yè)學報;2014年03期

5 鄧祖麗穎;陳陸;;豬流行性腹瀉病毒巢式RT-PCR檢測方法的建立及應用[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年01期

6 ;PEDV已出現(xiàn)了部分基因變異[J];畜禽業(yè);2014年01期

7 栗柱;;美國養(yǎng)豬業(yè)探討飼料在預防PEDV擴散中的作用[J];獸醫(yī)導刊;2014年06期

8 李寶賢;馬廣鵬;葛俊偉;李一經(jīng);;豬流行性腹瀉病毒功能性受體的鑒定[J];病毒學報;2009年03期

9 ;Cloning the Structure Genes and Expression the N Gene of Porcine Epidemic Diarrhea Virus DX[J];Virologica Sinica;2009年03期

10 田克恭;;兔胸水滲出病[J];上海實驗動物科學;1993年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 余麗蕓;侯喜林;;Development and Evalutaion of Enzyme-Linked mmunosorbent Assay Based on Recombinant Nucleocapsid Protein for Detection of Porcine Epidemic Diarrhea (PEDV) Antibodies[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜寄生蟲學分會第五次代表大會暨第八次學術研討會論文集[C];2004年

2 王金洛;宋維平;徐福洲;楊兵;賴平安;王琴;孟燕妮;;抗豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體(PEDV-IgY)及其特性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2003年學術年會論文集[C];2003年

3 孫東波;馮力;時洪艷;陳建飛;;豬流行性腹瀉病毒分子生物學研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

4 孫東波;朗洪武;時洪艷;陳建飛;崔曉辰;王承寶;佟有恩;馮力;;PEDV S蛋白B細胞抗原表位的篩選和鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

5 鄭逢梅;趙軍;霍金耀;李歡;楊霞;常洪濤;杜季梅;王曉夢;王川慶;;PEDV流行株N基因主要抗原表位原核表達及ELISA方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學術研討會論文集[C];2013年

6 ;Identification of two novel B cell epitopes on porcine epidemic diarrhea virus spike protein[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

7 李嘉愛;賴月輝;鄒永新;羅映霞;吳文福;巫月生;;PEDV免疫母雞血清抗體和蛋黃抗體的消長規(guī)律及其相關性測定[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2003年學術年會論文集[C];2003年

8 ;Spike protein region (aa 636～789) of porcine epidemic diarrhea virus is essentIal for induction of neutralizing antibodies[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

9 董世娟;朱于敏;于瑞嵩;李震;;我國PEDV分子流行病學研究進展[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學術研討會論文集[C];2013年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 石達;宿主蛋白NPM1、EB3和HSP47對PEDV復制影響[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

2 曹麗艷;豬流行性腹瀉病毒感染豬小腸上皮細胞抑制IFN-β產(chǎn)生及激活NF-κB機理研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2015年

3 張月;豬流行性腹瀉病毒S基因變異分析及嗜酸乳桿菌口服疫苗的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2016年

4 李任峰;河南省豬流行性腹瀉病毒遺傳進化分析及免疫學檢測方法的建立[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年

5 孫瑞芹;華南地區(qū)豬流行性腹瀉病毒的分子流行病學與病原學研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2014年

6 畢靜;豬流行性腹瀉病毒AJ1102株的分離、鑒定及其分子進化特征[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

7 葛俊偉;豬流行性腹瀉病毒主要結(jié)構蛋白不同抗原片段在重組干酪乳桿菌中的表達及其免疫學評價[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張百靈;豬流行性腹瀉病毒（PEDV）木瓜樣蛋白酶功能研究[D];揚州大學;2011年

2 石明明;豬流行性腹瀉病毒（PEDV）及其抗體檢測方法的研究與應用[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2012年

3 徐天;豬IEC酵母cDNA文庫的構建及與PEDV結(jié)構蛋白互作蛋白的篩選[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

4 潘溪;豬流行性腹瀉病毒的分離鑒定及ELISA檢測方法的初步建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2015年

5 許夏澎;某規(guī)�；i場豬流行性腹瀉病毒檢測及主要毒力基因克隆分析[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

6 王佳;豬群腹瀉癥候群病原和病因研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

7 蔡青秀;豬流行性腹瀉病毒主要結(jié)構基因遺傳變異分析及ELISA檢測方法的建立[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2015年

8 劉連增;豬流行性腹瀉病毒全長cDNA克隆及復制子的構建[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2015年

9 朱衛(wèi)霞;豬流行性腹瀉病毒HBMC/2012株的致病性與免疫研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學;2015年

10 周兵強;河南省豬流行性腹瀉病毒流行病學調(diào)查及CHHeN-ZZ株培養(yǎng)特性研究[D];河南科技大學;2015年

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本文編號：944115