發(fā)布時(shí)間：2017-09-24 17:33

  本文關(guān)鍵詞：Mybph基因在肌細(xì)胞增殖、分化中的調(diào)控作用研究

  更多相關(guān)文章： 骨骼肌 增殖 分化 細(xì)胞周期 Mybph 轉(zhuǎn)錄調(diào)控

【摘要】：肌肉發(fā)育過程是一個(gè)十分復(fù)雜的進(jìn)程,在其發(fā)育過程中受到了很多基因及轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控。由于肌肉發(fā)育的復(fù)雜性,雖然現(xiàn)在已經(jīng)確定了一批對(duì)肌肉發(fā)育有調(diào)控作用的調(diào)控因子,但仍有很多與肌發(fā)育相關(guān)的基因或轉(zhuǎn)錄因子有待研究。有研究報(bào)道,Mybph基因在肌肉發(fā)育過程中差異性表達(dá),而且會(huì)與其它轉(zhuǎn)錄因子共同作用調(diào)控肌肉發(fā)育。因此,為了驗(yàn)證Mybph基因?qū)〖?xì)胞的調(diào)控作用,我們檢測了豬不同組織中Mybph基因的相對(duì)表達(dá)情況;通過生物信息學(xué)對(duì)Mybph蛋白表達(dá)位置進(jìn)行預(yù)測,并使用激光共聚焦技術(shù)進(jìn)行驗(yàn)證;檢測Mybph基因在C2C12細(xì)胞分化過程中的時(shí)空表達(dá);構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Mybph和合成Mybph基因的干涉片段,轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞,通過實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)(RTCA)、免疫熒光技術(shù)、western blot、流式細(xì)胞術(shù)、熒光定量PCR技術(shù)等分析Mybph基因?qū)〖?xì)胞生長的影響。主要研究結(jié)果如下:1.運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測了豬心、肝、脾、肺、腎、背肌、卵巢、子宮內(nèi)膜、垂體和下丘腦等10個(gè)組織中Mybph基因的表達(dá)量。結(jié)果顯示,Mybph基因在各組織都有表達(dá),在背肌中表達(dá)量最高,在其余組織的相對(duì)表達(dá)量較低。2.利用生物信息學(xué)的方法對(duì)Mybph蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)位置進(jìn)行預(yù)測,發(fā)現(xiàn)Mybph蛋白有98.5%的可能是在細(xì)胞質(zhì)表達(dá),只有1.5%的可能性在細(xì)胞核表達(dá)。此外,通用激光共聚焦技術(shù)對(duì)Mybph蛋白在肌細(xì)胞中的表達(dá)位置進(jìn)行了驗(yàn)證,結(jié)果顯示,Mybph蛋白在細(xì)胞質(zhì)表達(dá),與生物信息學(xué)預(yù)測相吻合。3.利用RT-PCR方法檢測Mybph基因在C2C12細(xì)胞分化過程中的時(shí)空表達(dá)情況,結(jié)果顯示,隨著細(xì)胞分化,相對(duì)表達(dá)量升高。4.利用RT-PCR技術(shù)檢測上調(diào)/下調(diào)Mybph基因?qū)〖?xì)胞分化相關(guān)基因Myog、Myhc和Myomaker相對(duì)表達(dá)量的影響。結(jié)果顯示,上調(diào)Mybph基因使得肌細(xì)胞分化相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量總體下降,下調(diào)Mybph基因使得肌細(xì)胞分化相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量總體上升。5.運(yùn)用實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)檢測上調(diào)/下調(diào)Mybph基因?qū)2C12細(xì)胞增殖的影響,發(fā)現(xiàn)上調(diào)Mybph基因能夠抑制細(xì)胞數(shù)目的增殖,下調(diào)Mybph基因能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖。6.使用免疫熒光技術(shù)和western blot技術(shù)在蛋白水平檢測上調(diào)/下調(diào)Mybph對(duì)細(xì)胞增殖標(biāo)記蛋白Ki67表達(dá)量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),上調(diào)Mybph基因能夠抑制Ki67的表達(dá),下調(diào)Mybph基因能夠促進(jìn)Ki67的表達(dá)。7.運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測上調(diào)/下調(diào)Mybph基因?qū)2C12細(xì)胞周期的影響,結(jié)果顯示,Mybph參與了細(xì)胞周期的調(diào)節(jié),上調(diào)Mybph會(huì)使得更多細(xì)胞停留在G1期,下調(diào)Mybph會(huì)使得更多細(xì)胞停留在G2期和S期。
【關(guān)鍵詞】：骨骼肌 增殖 分化 細(xì)胞周期 Mybph 轉(zhuǎn)錄調(diào)控
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.2
【目錄】：

• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 縮略語表12-13
• 1 前言13-22
• 1.1 研究問題的由來13
• 1.2 骨骼肌生長發(fā)育調(diào)控相關(guān)研究13-18
• 1.2.1 骨骼肌發(fā)育的基本過程14-15
• 1.2.2 骨骼肌生長發(fā)育過程中主要調(diào)控因子研究進(jìn)展15-17
• 1.2.3 骨骼肌的再生17-18
• 1.3 Mybph基因研究進(jìn)展18-21
• 1.3.1 Mybph基因的結(jié)構(gòu)18-19
• 1.3.2 Mybph基因的功能研究進(jìn)展19-21
• 1.4 研究目的與意義21-22
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法22-42
• 2.1 材料22-26
• 2.1.1 豬組織樣品22
• 2.1.2 細(xì)胞系、載體和菌株22-23
• 2.1.3 主要試劑與試劑盒23-24
• 2.1.4 主要試劑的配制24-25
• 2.1.5 主要儀器設(shè)備25-26
• 2.1.6 主要生物學(xué)分析軟件及網(wǎng)站26
• 2.2 試驗(yàn)方法26-42
• 2.2.1 組織和細(xì)胞總RNA的提取26-27
• 2.2.2 cDNA的合成27-28
• 2.2.3 引物的設(shè)計(jì)28-29
• 2.2.4 PCR擴(kuò)增反應(yīng)29
• 2.2.5 豬組織表達(dá)譜的構(gòu)建29-30
• 2.2.6 真核表達(dá)載體的構(gòu)建30-33
• 2.2.7 干涉片段的合成33
• 2.2.8 細(xì)胞培養(yǎng)及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染33-35
• 2.2.9 激光共聚焦技術(shù)35
• 2.2.10 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)35-36
• 2.2.11 免疫熒光技術(shù)36-37
• 2.2.12 Western Blot技術(shù)37-40
• 2.2.13 細(xì)胞周期的測定40-42
• 3 結(jié)果與分析42-56
• 3.1 Mybph基因的組織表達(dá)譜42
• 3.2 生物信息學(xué)對(duì)小鼠Mybph蛋白亞細(xì)胞定位的預(yù)測42-43
• 3.3 Mybph在C2C12細(xì)胞中的表達(dá)定位43-44
• 3.4 真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-Mybph的構(gòu)建44-46
• 3.4.1 C2C12細(xì)胞RNA的提取及cDNA的合成44-45
• 3.4.2 PMD-18T-Mybph質(zhì)粒與真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)的雙酶切45-46
• 3.5 干涉片段的選擇46
• 3.6 Mybph基因在C2C12細(xì)胞分化過程中的時(shí)空表達(dá)情況46-47
• 3.7 Mybph基因?qū)2C12細(xì)胞分化的影響47-50
• 3.7.1 超表達(dá)Mybph基因?qū)2C12細(xì)胞分化的影響47-48
• 3.7.2 干涉Mybph基因?qū)2C12細(xì)胞分化的影響48-50
• 3.8 Mybph基因?qū)2C12細(xì)胞增殖的影響50-54
• 3.8.1 實(shí)時(shí)無標(biāo)記分析技術(shù)（RCTA）檢測Mybph基因?qū)2C12細(xì)胞增殖的影響50-51
• 3.8.2 免疫熒光技術(shù)檢測Mybph基因?qū)2C12細(xì)胞增殖影響51-54
• 3.8.3 Western blot檢測Mybph基因?qū)2C12細(xì)胞增殖影響54
• 3.9 Mypbh基因?qū)?xì)胞周期的影響54-56
• 4 討論56-59
• 4.1 Mybph基因在成肌細(xì)胞時(shí)空分化過程中表達(dá)差異56
• 4.2 Mybph基因在豬不同組織的差異性表達(dá)56
• 4.3 Mybph基因?qū)Τ杉〖?xì)胞增殖、分化的調(diào)控56-58
• 4.3.1 Mybph基因?qū)Τ杉〖?xì)胞分化的影響57
• 4.3.2 Mybph基因?qū)Τ杉〖?xì)胞增殖的影響57-58
• 總結(jié)58-59
• 5 小結(jié)59-61
• 5.1 本研究的主要結(jié)果59-60
• 5.2 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)60
• 5.3 下一步工作計(jì)劃60-61
• 參考文獻(xiàn)61-69
• 致謝69

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 皮埃爾·達(dá)呂,水金;從智能的基因到基因的智能[J];第歐根尼;2000年01期

2 王世若;基因與免疫的關(guān)系[J];中國獸醫(yī)科技;1991年01期

3 郭萍,李振岐;植物—病原互作系統(tǒng)中基因?qū)蜃R(shí)別研究[J];西北植物學(xué)報(bào);2000年06期

4 王慶華,尹小燕,張舉仁;植物的基因?qū)蚩共⌒詫W(xué)說[J];生命的化學(xué);2003年01期

5 ;基因?qū)先酥橇λ礁叩陀兄匾绊慬J];中國鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)信息;1997年08期

6 ;基因誘變、重組、克隆[J];生物技術(shù)通報(bào);1993年01期

7 李康;李勝軍;于洋;董軼博;溫瑞明;陳世凱;葉尚;裴新梧;;香蕉MuNPR1-1基因的克隆與表達(dá)分析[J];生物技術(shù)通報(bào);2010年09期

8 葉瑞松;萬慶慧;趙素梅;高士爭;;FTO——肥胖相關(guān)新基因[J];云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年06期

9 Atsushi Kawakami;張雨青;;四個(gè)編碼蠶素的基因結(jié)構(gòu)與組織[J];國外農(nóng)學(xué)-蠶業(yè);1992年03期

10 李學(xué)斌,王瑩,蘇勝強(qiáng),李培慶;控制數(shù)量性狀的基因?qū)?shù)及作用的估計(jì)[J];河南職技師院學(xué)報(bào)(綜合版);1999年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張蕊;Liang Zhao;Tom Gonda;;慢病毒介導(dǎo)的多西環(huán)素可誘導(dǎo)式短發(fā)夾RNA抑制K562細(xì)胞系e-myb基因的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

2 高艷紅;岳文;秦立鵬;張鵬;陳琳;裴雪濤;;人Spindlin1基因的功能初探[A];第九屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

3 王衛(wèi)東;陳正堂;李德志;;腫瘤治療新策略——基因—放射治療:原理、現(xiàn)狀及展望[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)放射腫瘤治療學(xué)分會(huì)六屆二次暨中國抗癌協(xié)會(huì)腫瘤放療專業(yè)委員會(huì)二屆二次學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

4 王今達(dá);;21世紀(jì)生命科學(xué)飛躍發(fā)展的基礎(chǔ)——基因工程[A];2000年全國危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

5 李寶健;許新萍;馮道榮;范欽;朱華晨;林莉;;論改良生物體遺傳性的多基因策略——Ⅰ.多基因改良策略將成為未來基因工程的主流方向[A];中國生物工程學(xué)會(huì)第三次全國會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

6 王根軒;;基因表達(dá)格局與植物數(shù)量性狀的控制[A];全國植物分子生物學(xué)與生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2000年

7 彭志宏;黃柏勝;文芳;韓仰;劉發(fā)益;鄔力祥;;Mettl9基因?qū)251細(xì)胞生長的影響及機(jī)制研究[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2013年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2013年

8 付凌潔;張淑蘭;;RASSF1A基因在卵巢癌中的表達(dá)及其對(duì)增殖、凋亡的影響[A];東北三省第四屆婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

9 錢偉;何云剛;賴建華;舒坤賢;譚德勇;余敏;;p53基因?qū)ybbp1a(p160)基因的正調(diào)控作用研究[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

10 薛世偉;林艷麗;熊福銀;吳曉潔;周艷榮;郭虹敏;陳紅星;陳樹林;;人Nanog基因的克隆及其在CHO-K1細(xì)胞中的表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 全國政協(xié)委員 民盟中央委員 曹義孫;立法規(guī)范基因檢測[N];團(tuán)結(jié)報(bào);2010年

2 呂回;鳥兒會(huì)唱人會(huì)說 只緣基因太相似[N];廣東科技報(bào);2004年

3 ;認(rèn)識(shí)我們的基因[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

4 本報(bào)記者 張麗;基因可以透視明天嗎[N];中國消費(fèi)者報(bào);2001年

5 姜海;科學(xué)家發(fā)現(xiàn)新的致盲基因[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

6 徐陽;基因與長壽[N];光明日?qǐng)?bào);2000年

7 記者 林小春 任海軍;美國研究表明懶或許源于基因[N];新華每日電訊;2013年

8 盧菁;怕胖可就是管不住嘴,原是基因作怪[N];新華每日電訊;2008年

9 本報(bào)記者 盧雁妮;“從對(duì)生命及疾病本源的認(rèn)識(shí)到基因科技造福人類”講座開講[N];黔西南日?qǐng)?bào);2014年

10 張小軍;美發(fā)現(xiàn)老鼠性別新基因[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉芳;RB94基因在非小細(xì)胞肺癌治療中的作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

2 王宗丹;遠(yuǎn)程調(diào)控元件mbr選擇性協(xié)調(diào)BCL2和NOXA基因轉(zhuǎn)錄活性的機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

3 王曉樂;水稻脆鞘基因BSH1的圖位克隆與功能分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 金旭;心血管內(nèi)靶向定位基因遞送體系—載基因支架的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

5 楊春霞;生活方式和基因多態(tài)與食道癌的關(guān)系[D];四川大學(xué);2005年

6 吳漢林;人NIT1基因cDNA的克隆、原核表達(dá)及抗體制備[D];四川大學(xué);2005年

7 何勇;p73基因在人肺癌中的表達(dá)及對(duì)其細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 張賀龍;p53和K-ras基因及其表達(dá)產(chǎn)物的檢測對(duì)肺癌患者診斷價(jià)值的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1998年

9 劉金毅;EcoRII R-M基因在大腸桿菌中的表達(dá)及EcoRII（M）特異性甲基化對(duì)正常和腫瘤細(xì)胞的影響研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1999年

10 朱大興;利用定點(diǎn)突變技術(shù)研究nm23-H1基因逆轉(zhuǎn)肺癌侵襲轉(zhuǎn)移表型的分子機(jī)制[D];四川大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張潤賢;論基因權(quán)的私權(quán)屬性及民法保護(hù)[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

2 高亞軍;細(xì)胞內(nèi)表達(dá)人源C-型凝集素2A(CLEC2A)基因抗腫瘤的機(jī)制研究[D];浙江理工大學(xué);2016年

3 李殿宇;過表達(dá)CD40L基因?qū)asumi-1/ADM細(xì)胞株增殖、凋亡及耐藥的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

4 王蕊;牦牛BCMO1和BCO2基因的克隆與定量表達(dá)[D];青海大學(xué);2016年

5 劉安琪;家蠶BmJun與BmNep1基因的功能研究[D];蘇州大學(xué);2016年

6 李娟;EVI1基因陽性急性髓系白血病的臨床特點(diǎn)與預(yù)后分析[D];蘇州大學(xué);2016年

7 牛鵬飛;Mybph基因在肌細(xì)胞增殖、分化中的調(diào)控作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 黃建芳;豬miRNA-423-5p靶向SRF基因調(diào)控肌肉發(fā)育的初步研究[D];廣西大學(xué);2016年

9 汪佳宏;基于自由詞的基因功能注釋和分子網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

10 牛牛;COX-2基因和肺癌相關(guān)性研究[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2006年

，

本文編號(hào)：912559