發(fā)布時間：2017-09-17 16:07

  本文關(guān)鍵詞：沙丁胺醇膠體金免疫層析試紙條的研制及其應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 沙丁胺醇 膠體金 免疫層析試紙條 動物組織 飼料

【摘要】：沙丁胺醇是一種人工合成的選擇性β-受體激動劑藥物,也是治療平喘類疾病的藥物。這種物質(zhì)非法使用于動物飼養(yǎng)中,可以提高瘦肉率,但是人們食用含有沙丁胺醇含量高的動物組織后,會有頭痛、神經(jīng)過敏、心悸等癥狀,嚴重會損傷肝臟,威脅著人們的身體健康。目前,沙丁胺醇的檢測標準是色譜法,此方法樣品前處理復(fù)雜,需要大型儀器和專業(yè)人員操作,耗費時間長。膠體金免疫層析技術(shù)是一種將膠體金作為標記物免疫學(xué)分析技術(shù),應(yīng)用于食品安全、生物技術(shù)、農(nóng)業(yè)科學(xué)、人類醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域,此技術(shù)優(yōu)點是反應(yīng)快速、靈敏,操作簡單方便,成本低易于工廠化生產(chǎn)。本研究旨在建立一種沙丁胺醇的膠體金免疫層析檢測方法。通過采用檸檬酸三鈉法制備兩種不同粒徑的膠體金溶液,將具有沙丁胺醇特異性的金標探針均勻噴在GL0194型的玻璃纖維素膜上,烘干后即為金標墊。經(jīng)比較試驗選用Millipore 135硝酸纖維素膜作為層析膜;控制線(T線)選用1.0 mg/mL的羊抗兔IgG;用濃度為0.6 mg/mL的沙丁胺醇包被抗原(SAL-BSA)噴涂檢測線(C線),最后組裝成試紙條,并且對試紙條應(yīng)用于動物組織和飼料樣品前處理方法進行單因素優(yōu)化,選出合適的方案。通過比較兩種粒徑大小不同的膠體金溶液進行最佳蛋白標記量、最適pH以及金標探針制備的離心條件的確定,進而選擇出適合沙丁胺醇的最佳膠體金溶液是在100 mL的0.01%膠體金溶液中添加1%檸檬酸三鈉的量為1.8 mL所對應(yīng)的膠體金粒徑;通過紫外-可見光分析和外觀觀察試驗確定了金標探針的最佳蛋白標記量為6μg/mL,最適pH為0.2mol/L碳酸鉀的加入量為8μL/mL;金標復(fù)溶液的配方為0.01 mol/L pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液加10%蔗糖、0.5%PEG、1%BSA和0.1%Na Cl,稀釋倍數(shù)為6倍;樣品墊的處理液配方為0.01 mol/L pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液加1%的蔗糖和1%的吐溫-20。樣品前處理方案為動物組織采用的前處理方法是5%三氯乙酸水解和超聲提取結(jié)合的方式,飼料采用的是0.2mol/L磷酸-甲醇(V:V,4:1)和超聲提取結(jié)合的方法。單因素優(yōu)化的結(jié)果為:樣品用量為2g,提取液體積為4 mL,超聲時間為8 min,離心時間為5 min。用制備好的免疫層析試紙條檢測沙丁胺醇標準品與已知含量的沙丁胺醇的動物組織和飼料,檢測限分別為3μg/L、10μg/kg和12μg/kg,在其檢測限范圍內(nèi)重現(xiàn)性為100%,沒有假陽性及假陰性出現(xiàn)。對制備的沙丁胺醇試紙條的驗證試驗表明,該試紙條穩(wěn)定性良好,對沙丁胺醇的特異性強,可以很好地應(yīng)用于動物組織和飼料樣品的實際檢測。
【關(guān)鍵詞】：沙丁胺醇 膠體金 免疫層析試紙條 動物組織 飼料
【學(xué)位授予單位】：集美大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S859.84;S816.17
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-11
• 主要符號表11-12
• 第1章 引言12-24
• 1.1 沙丁胺醇概述12-14
• 1.1.1 沙丁胺醇的理化性質(zhì)12
• 1.1.2 沙丁胺醇的藥理作用12-13
• 1.1.3 沙丁胺醇的營養(yǎng)再分配作用13
• 1.1.4 沙丁胺醇的毒性作用13
• 1.1.5 沙丁胺醇的國內(nèi)外應(yīng)用現(xiàn)狀13-14
• 1.2 沙丁胺醇的代謝規(guī)律14
• 1.2.1 沙丁胺醇的吸收代謝規(guī)律14
• 1.2.2 沙丁胺醇在動物體內(nèi)殘留的消除規(guī)律14
• 1.3 沙丁胺醇的國內(nèi)外檢測標準14-17
• 1.3.1 國內(nèi)標準14-17
• 1.3.2 國外標準17
• 1.4 沙丁胺醇殘留檢測方法17-20
• 1.4.1 感官檢測法17-18
• 1.4.2 液相色譜法18
• 1.4.3 氣相色譜法18
• 1.4.4 免疫分析法(IA)18-19
• 1.4.5 毛細管電泳法（CE）19
• 1.4.6 熒光光度法和電化學(xué)免疫法19-20
• 1.5 膠體金免疫層析技術(shù)的研究現(xiàn)狀20-23
• 1.5.1 膠體金免疫層析及其原理20
• 1.5.2 膠體金免疫層析的特點20-21
• 1.5.3 膠體金免疫層析技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用21-22
• 1.5.4 膠體金免疫層析技術(shù)的發(fā)展趨勢及展望22-23
• 1.6 論文研究目的與研究內(nèi)容23-24
• 1.6.1 研究目的23
• 1.6.2 研究內(nèi)容23-24
• 第2章 沙丁胺醇膠體金免疫層析試紙條的研制24-49
• 2.1 試驗材料24-25
• 2.1.1 主要藥品試劑24-25
• 2.1.2 主要儀器和設(shè)備25
• 2.1.3 主要試驗耗材25
• 2.2 試驗方法25-32
• 2.2.1 膠體金溶液的制備25-26
• 2.2.2 膠體金溶液質(zhì)量的鑒定26
• 2.2.3 金標探針的制備26-28
• 2.2.4 金標探針的鑒定及分析28-29
• 2.2.5 樣品墊的制備29
• 2.2.6 金標墊的制備29-30
• 2.2.7 NC膜劃線30
• 2.2.8 試紙條的組裝與結(jié)果判斷30-31
• 2.2.9 試紙條的性能測定及評價31-32
• 2.3 試驗結(jié)果32-46
• 2.3.1 膠體金溶液的制備及其質(zhì)量鑒定32-33
• 2.3.2 金標探針的制備33-36
• 2.3.3 金標探針的鑒定與分析36-38
• 2.3.4 樣品墊的選擇與處理38-39
• 2.3.5 金標墊的選擇與制備39-41
• 2.3.6 NC膜劃線41-43
• 2.3.7 試紙條性能測試43-46
• 2.4 討論46-47
• 2.4.1 膠體金溶液的制備46
• 2.4.2 金標探針的制備46-47
• 2.4.3 試紙條的組裝材料47
• 2.4.4 環(huán)境的溫度、濕度47
• 2.5 本章小結(jié)47-49
• 2.5.1 膠體金溶液的制備、鑒定及選擇47-48
• 2.5.2 金標探針的鑒定48
• 2.5.3 試紙條的組裝48
• 2.5.4 試紙條性能測試48-49
• 第3章 沙丁胺醇膠體金免疫層析試紙條的應(yīng)用49-63
• 3.1 試驗材料49-50
• 3.1.1 主要試劑與材料49-50
• 3.1.2 主要儀器設(shè)備50
• 3.2 膠體金免疫層析試紙條樣品的前處理方法選擇50-52
• 3.2.1 新鮮動物組織的樣品前處理50-51
• 3.2.2 飼料的樣品前處理51-52
• 3.3 樣品前處理方法的優(yōu)化52-53
• 3.3.1 樣品用量m的選擇52
• 3.3.2 提取液體積V的選擇52
• 3.3.3 超聲提取時間t_1的選擇52
• 3.3.4 離心時間t_2的選擇52-53
• 3.4 高效液相色譜法串聯(lián)質(zhì)譜法檢測動物組織和飼料中的沙丁胺醇53
• 3.4.1 新鮮動物組織和飼料的樣品前處理53
• 3.4.2 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的測定條件53
• 3.5 樣品前處理方法的選擇結(jié)果53-56
• 3.5.1 新鮮動物組織的樣品前處理53-55
• 3.5.2 飼料的樣品前處理55-56
• 3.6 樣品前處理方法的優(yōu)化結(jié)果56-60
• 3.6.1 樣品用量m的選擇56-57
• 3.6.2 提取液體積V的選擇57-58
• 3.6.3 超聲時間t_1的選擇58
• 3.6.4 離心時間t_2的選擇58-59
• 3.6.5 樣品檢測限結(jié)果59-60
• 3.7 沙丁胺醇膠體金免疫層試紙條與HPLC-MS的相關(guān)性60-62
• 3.7.1 HPLC-MS方法的結(jié)果60-61
• 3.7.2 沙丁胺醇試紙條和HPLC-MS的相關(guān)性61-62
• 3.8 討論62
• 3.9 本章小結(jié)62-63
• 3.9.1 膠體金免疫層析試紙條樣品的前處理方法選擇62
• 3.9.2 樣品前處理方法的優(yōu)化及檢測限62-63
• 第4章 結(jié)論與展望63-65
• 4.1 結(jié)論63-64
• 4.1.1 沙丁胺醇膠體金免疫層析試紙條的制備63-64
• 4.1.2 沙丁胺醇膠體金免疫層析試紙條的應(yīng)用64
• 4.2 展望64-65
• 致謝65-66
• 參考文獻66-72

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