本文關(guān)鍵詞：大腸桿菌對奶牛乳腺上皮細胞TGF-β1、bFGF和PDGF表達的影響

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【摘要】：大腸桿菌是引起奶牛乳腺炎最主要的病原菌,大多引起臨床型乳腺炎,嚴重的引發(fā)乳腺纖維化。本實驗目的是探討當大腸桿菌作用于奶牛乳腺上皮細胞(BMEC)時對TGF-β1、TPR1、bFGF、FGFR2、PDGF和PDGFRβ的表達影響,以及宿主對大腸桿菌的免疫應答過程中是否有TLR2和TLR4的參與,且其作用如何,以便探索奶牛乳腺纖維化的發(fā)病機理,為奶牛乳腺纖維化的防治提供指導。本實驗采用熱滅活大腸桿菌菌液(0.105cfu/mL、106cfu/mL、108cfu/mL)作用于體外培養(yǎng)的BMEC,于不同時間點(6h、12h、24h、48h)用熒光定量PCR和Western blot兩種方法檢測受作細胞TGF-β1、bFGF、PDGF及其受體mRNA及蛋白的表達,同時采用相同方法檢測TLR2和TLR4 mRNA及蛋白的表達,采用Western blot方法檢測AP-1和NF-κB蛋白的表達情況。研究結(jié)果表明：(1)不同濃度的熱滅活E.coli作用于BMEC,不同時間點(6h、12h、24h、48h)均可促進TGF-β1、bFGF和PDGF及其受體mRNA和蛋白的表達。TGF-β1、 bFGF和PDGF及其受體的表達水平基本隨著時間的延長、濃度的增加而增加,呈時間和濃度依賴性。TGF-β1、TβR1 mRNA表達水平在12h最高,蛋白表達水平在24h最高,106cfu/mL菌液濃度處理組在四個時間點表達水平均最高;bFGF和FGFR2 mRNA和蛋白表達水平均高于對照組,24h表達水平最高；PDGF-BB mRNA表達量在12h達到最大,PDGF-BB蛋白表達量在24h達到最大。PDGFRβ蛋白表達水平在12h達到最高。(2)熱滅活E.coli作用于BMEC均能促進TLR2和TLR4 mRNA和蛋白的表達。TLR2和TLR4的表達水平基本隨時間的延長,濃度的增大而增高。TLR2 mRNA表達水平在12h達到最高,與對照組相比差異極顯著(P0.01), TLR2蛋白表達水平在48h達最高,差異顯著(P0.05); TLR4mRNA表達水平在24h達到最大。TLR4蛋白表達水平均高于對照組,有統(tǒng)計學意義。(3)熱滅活E.coli能促進NF-κB和AP-1蛋白表達,表達水平均高于對照組,基本呈時間和濃度依賴性。NF-κB蛋白表達水平與對照組相比雖不具有統(tǒng)計學意義(P0.05),但均較對照組高,105cfu/mL菌液處理組濃度表達水平最高。AP-1表達水平隨著時間的延長,濃度的增大,表達增加,106 cfu/mL濃度表達水平最高,在12h、24h差異極顯著(P0.01)。綜上所述,熱滅活的E.coli可以促進BMEC TGF-β1、bFGF和PDGF三種細胞因子及其受體的mRNA及蛋白的表達,呈一定的時間和濃度依賴性；熱滅活E.coli可促進TLR2、TLR4mRNA及蛋白的表達,具有時間和濃度依賴關(guān)系；熱滅活E.coli促進BMEC NF-κB和AP-1的蛋白的表達,提示E.coli促進BMEC表達促纖維化細胞因子,可能與NF-κB和AP-1信號轉(zhuǎn)導通路的激活有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：大腸桿菌 BMEC 奶牛乳腺纖維化 TGF-β1 bFGF PDGF TLR2 TLR4 AP-1 NF-κB
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S823
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 1 引言11-19
• 1.1 大腸桿菌對奶牛乳腺的致病性11-15
• 1.1.1 大腸桿菌的病原學12
• 1.1.2 奶牛乳腺對大腸桿菌的先天性免疫反應12-13
• 1.1.3 Toll-like receptor13-14
• 1.1.4 TLRs-NF-κB和TLRs-AP-1信號通路在大腸桿菌感染過程中發(fā)揮的作用14-15
• 1.2 TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受體生物學特性和在組織器官纖維化中的發(fā)揮作用15-17
• 1.2.1 組織器官纖維化的研究15
• 1.2.2 TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受體生物學特性和在組織器官纖維化中發(fā)揮的作用15-17
• 1.3 研究目的及意義17-19
• 2 實驗一 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TGF-β1、bFGF、PDGF-BB及其受體表達的影響19-46
• 2.1 實驗材料與方法19-24
• 2.1.1 實驗材料19-20
• 2.1.2 實驗方法20-24
• 2.1.3 數(shù)據(jù)分析24
• 2.2 實驗結(jié)果24-43
• 2.2.1 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TGF-β1/TβR1表達的影響24-31
• 2.2.2 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對bFGF/FGFR2表達的影響31-37
• 2.2.3 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對PDGF-BB/PDGFRβ表達的影響37-43
• 2.3 討論43-45
• 2.3.1 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TGF-β1/TβR1 mRNA和蛋白表達的影響43
• 2.3.2 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對bFGF/FGFR2 mRNA和蛋白表達的影響43-44
• 2.3.3 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對PDGF-BB/PDGFRβ mRNA和蛋白表達的影響44-45
• 2.4 小結(jié)45-46
• 3 實驗二 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TLR2、TLR4、NF-κB和AP-1的表達影響46-60
• 3.1 實驗材料與方法46-47
• 3.1.1 實驗材料46
• 3.1.2 實驗方法與內(nèi)容46-47
• 3.2 實驗結(jié)果47-58
• 3.2.1 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TLR2表達的影響47-51
• 3.2.2 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TLR4表達的影響51-54
• 3.2.3 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對NF-κB/AP-1蛋白表達的影響54-58
• 3.3 討論58-59
• 3.3.1 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對TLR2和TLR4表達的影響58
• 3.3.2 熱滅活大腸桿菌作用于體外BMEC對NF-κB和AP-1表達的影響58-59
• 3.4 小結(jié)59-60
• 4 全文結(jié)論60-61
• 致謝61-62
• 參考文獻62-69
• 作者簡介69

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本文編號：850764