發(fā)布時間：2017-09-13 09:34

  本文關(guān)鍵詞：陜西部分地區(qū)山羊畢氏腸微孢子蟲感染情況及其基因型研究

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【摘要】：羊是重要的經(jīng)濟動物,在我國畜牧業(yè)發(fā)展中占據(jù)重要位置。陜西省的陜北白絨山羊、薩能奶山羊、陜北黑山羊是我國重要的山羊品種,也是陜西主要的經(jīng)濟動物。隨著羊產(chǎn)業(yè)規(guī)模的不斷擴大,羊群疾病逐漸成為阻礙產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素。其中,微孢子蟲病不僅危害羊群健康,某些種類還能導(dǎo)致人類疾病。畢氏腸微孢子蟲是動物及人微孢子蟲病的主要病原體,它能使免疫機能正常的宿主出現(xiàn)自限性腹瀉,對于免疫力低下或有免疫缺陷的宿主可能會造成嚴(yán)重腹瀉,甚至威脅生命。鑒于畢氏腸微孢子蟲不僅影響動物的生產(chǎn)性能及價值,還有一定的人獸共患風(fēng)險,威脅人類健康,本研究對陜西省部分地區(qū)不同生產(chǎn)用途山羊畢氏腸微孢子蟲的感染情況及其基因型進行研究,為防控人和動物微孢子蟲病提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。本研究首先利用基于ITS基因位點的巢式PCR技術(shù),弄清陜西部分地區(qū)山羊畢氏腸微孢子蟲的感染情況及其基因型,再采用基于微衛(wèi)星和小衛(wèi)星位點的多位點序列分型技術(shù)對獲得的分離株進行群體遺傳分析,進而評估不同用途山羊畢氏腸微孢子蟲的遺傳多樣性和人獸共患風(fēng)險。本研究結(jié)果顯示,三種不同生產(chǎn)用途的山羊中,薩能奶山羊的感染率(32.9%)顯著高于絨山羊(15.9%,P0.05)和肉山羊(15.0%,P0.05);3~6月齡羔羊畢氏腸微孢子蟲感染率最高,為33.3%,其次為0~2月齡羔羊(24.4%)和7~12月齡山羊(17.4%),而12月齡的成年羊感染率最低,為15.1%。本研究共獲得122份陽性畢氏腸微孢子蟲分離株,獲得4種不同的基因型,包括3種已知基因型BEB6、CHG1、CHG2和1種新基因型SX1。基于微衛(wèi)星位點(MS1、MS3、MS7)和小衛(wèi)星位點(MS4)進行擴增發(fā)現(xiàn),在MS1、MS4和MS7位點的擴增效率依次為28.7%(35/122)、18.0%(22/122)、50.8%(62/122),而在MS3位點所有樣品均未獲得有效擴增。核苷酸序列分析表明,所有樣品的MS1、MS4和MS7位點分別具有16、9和18個基因型,共形成了14個MLGs。其中,50份絨山羊陽性樣品三個位點擴增效率分別為10.0%(5/50)、14.0%(7/50)和90.0%(45/50),分別具有3、3和10個基因型,共形成了5個MLGs;56份奶山羊陽性樣品三個位點的擴增效率依次為28.6%(16/56)、19.6%(11/56)和8.9%(5/56),分別組成4、4、1個基因型,共組成7個不同的MLGs;16份黑山羊陽性樣品在三個位點的擴增效率依次為為81.3%(13/16)、25.0%(4/16)、75.0%(12/16),分別具有9、2、7個基因型,構(gòu)成2個MLGs。綜上所述,本研究明確了陜西部分地區(qū)不同生產(chǎn)用途山羊存在畢氏腸微孢子蟲感染,發(fā)現(xiàn)了奶山羊樣品中存在能感染人的畢氏腸微孢子蟲基因型,遺傳進化分析顯示,新發(fā)現(xiàn)的基因型SX1具有宿主特異性。此外,本研究發(fā)現(xiàn)陜西省山羊的畢氏腸微孢子蟲存在遺傳多樣性,具有14個MLGs。這些研究結(jié)果表明,需要制定綜合性的防控措施控制該省的畢氏腸微孢子蟲感染,并采取有效手段防止其對人類的傳播。
【關(guān)鍵詞】：山羊 畢氏腸微孢子蟲 感染率 基因型
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.27
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 文獻綜述11-21
• 第一章 微孢子蟲與微孢子蟲病研究進展11-21
• 1.1 概述11-13
• 1.2 分類13
• 1.3 形態(tài)13-14
• 1.4 生活史14
• 1.5 流行病學(xué)14-16
• 1.6 臨床癥狀16
• 1.7 診斷16-19
• 1.7.1 顯微鏡檢測16-17
• 1.7.2 血清學(xué)方法17
• 1.7.3 分子生物學(xué)檢測17
• 1.7.4 基因型及分型工具17-19
• 1.8 治療19-20
• 1.9 預(yù)防20
• 1.10 本研究的目的與意義20-21
• 試驗研究21-36
• 第二章 陜西部分地區(qū)山羊畢氏腸微孢子蟲感染情況及其基因型研究21-36
• 2.1 材料與方法21-26
• 2.1.1 材料21-23
• 2.1.1.1 糞便樣品21-22
• 2.1.1.2 主要試劑22-23
• 2.1.1.3 主要溶液及其配制方法23
• 2.1.1.4 主要儀器與設(shè)備23
• 2.1.2 方法23-26
• 2.1.2.1 糞便樣品基因組DNA的提取23-24
• 2.1.2.2 畢氏腸微孢子蟲ITS基因擴增24-26
• 2.1.2.3 PCR陽性產(chǎn)物測序26
• 2.1.2.4 序列比對及種系發(fā)育分析26
• 2.1.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析26
• 2.2 結(jié)果26-32
• 2.2.1 畢氏腸微孢子蟲感染狀況26-28
• 2.2.2 基于ITS基因的基因分型及種系發(fā)育分析28-31
• 2.2.3 基于小衛(wèi)星、微衛(wèi)星位點巢式PCR擴增與MLST分型結(jié)果31-32
• 2.3 討論32-36
• 2.3.1 品種、年齡對畢氏腸微孢子蟲感染的影響33-34
• 2.3.2 山羊感染畢氏腸微孢子蟲不同基因型分析34
• 2.3.3 多位點序列分型分析34-35
• 2.3.4 防制措施35-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-43
• 致謝43-44
• 作者簡介44

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