本文關鍵詞：豬圓環(huán)病毒2d亞型衣殼蛋白在昆蟲細胞中的表達

  更多相關文章： 豬圓環(huán)病毒d亞型 衣殼蛋白 桿狀病毒表達系統(tǒng) 基因分型

【摘要】：為了在昆蟲細胞中表達豬圓環(huán)毒病2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)衣殼蛋白,本研究設計合成引物從臨床病料中擴增獲得豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus,PCV)山東株衣殼蛋白基因缺失核定位區(qū)的序列,并進行序列分析。將該片段克隆到桿狀病毒供體載體p Fast Bac-1上,然后轉化大腸桿菌(Escherichia coli)DH10-Bac感受態(tài)細胞,獲得重組穿梭桿粒,將該桿粒轉染到sf9昆蟲細胞中,觀察重組桿狀病毒致細胞病變效應,并采用PCR、間接免疫熒光實驗、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot鑒定衣殼蛋白的表達情況。結果表明,擴增獲得的豬圓環(huán)病毒山東株屬于PCV2d亞型,與我國目前使用的商品化疫苗株(PCV2a及PCV2b亞型)在160~180 aa抗原位點有差異。成功構建了重組供體質粒p Fast Bac1-PCV2d-Cap和重組穿梭桿粒Bacmid-PCV2d-Cap,獲得的重組桿狀病毒在昆蟲細胞中成功表達了約24 k D的PCV2d-Cap,該蛋白可以與豬圓環(huán)病毒陽性血清及His標簽抗體發(fā)生反應,證明具有良好的反應原性。本研究是我國首次采用桿狀病毒系統(tǒng)表達PCV2d亞型衣殼蛋白,為制備PCV2d亞單位疫苗以及酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒、防范PCV2d亞型流行提供了理論依據(jù)。
【作者單位】： 青島農業(yè)大學山東省高校預防獸醫(yī)學重點實驗室;
【關鍵詞】： 豬圓環(huán)病毒d亞型 衣殼蛋白 桿狀病毒表達系統(tǒng) 基因分型
【基金】：國家科技基礎性工作專項項目(No.2012FY111000) 山東省現(xiàn)代農業(yè)產業(yè)技術體系生豬產業(yè)創(chuàng)新團隊(No.SDAIT-06-022-08) 山東省自主創(chuàng)新及成果轉化專項(No.2014ZZCX07105)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus,PCV)是目前發(fā)現(xiàn)的最小的一種動物病毒,屬于圓環(huán)病毒科(Circoviri-dae)圓環(huán)病毒屬(Circovirus),為無囊膜、單鏈負股DNA病毒(Allan et al.,2012)。該病毒有2個血清型,即PCV1和PCV2(Lv et al.,2014;Ssemadaali etal.,2015)。PCV2又可分為5個基因亞

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本文編號：831103