本文關(guān)鍵詞：黃芪多糖調(diào)控種公雞睪丸差異表達(dá)miRNA的鑒定和功能分析

  更多相關(guān)文章： APS miRNA IFNGR2 MAP2K1 睪丸 種公雞

【摘要】：種公雞養(yǎng)殖是肉雞生產(chǎn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié),種公雞的繁殖性能會(huì)直接影響種蛋的受精率、孵化率和商品代肉雞生長(zhǎng)表現(xiàn)。睪丸作為種公雞的性腺,其良好的代謝及免疫狀況可保證種公雞具有良好的繁殖性能,從而確保種公雞在肉雞生產(chǎn)中的健康高效利用。黃芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)是一種高效綠色免疫調(diào)節(jié)劑,可顯著改善動(dòng)物體的免疫機(jī)能,還能調(diào)控動(dòng)物體的代謝過(guò)程。本研究在種公雞日糧中添加APS,研究APS對(duì)睪丸miRNA表達(dá)的影響,并闡明差異表達(dá)miRNA在睪丸代謝及免疫過(guò)程中所發(fā)揮的作用。試驗(yàn)一APS調(diào)控種公雞睪丸組織mi RNA的差異表達(dá)本試驗(yàn)通過(guò)small RNA-seq方法篩選種公雞睪丸中由于飼糧添加APS而引起的差異表達(dá)miRNA。選取1日齡科寶500肉雞父母代種公雞64只,隨機(jī)分為空白對(duì)照組(Control組)和APS處理組,每個(gè)處理4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)8只雞。對(duì)照組飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧,APS處理組在每千克基礎(chǔ)飼糧中額外添加10克APS,種公雞飼養(yǎng)40周時(shí),對(duì)各處理睪丸組織進(jìn)行高通量測(cè)序。結(jié)果表明,在種公雞睪丸中共發(fā)現(xiàn)1305種miRNA,584個(gè)miRNA共表達(dá)于種公雞睪丸Control組和APS組,有79和76個(gè)miRNA分別單獨(dú)存在于Control組和APS組。miRNA差異表達(dá)分析結(jié)果表明,種公雞飼糧添加APS可顯著改變種公雞睪丸miRNA的表達(dá)情況,共鑒定出33個(gè)差異表達(dá)mi RNA,其中16個(gè)miRNA上調(diào),17個(gè)miRNA下調(diào)。隨機(jī)選取7個(gè)差異表達(dá)miRNA進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證,結(jié)果表明測(cè)序結(jié)果準(zhǔn)確性較高,可代表睪丸組織樣品真實(shí)的miRNA表達(dá)狀況。試驗(yàn)二APS調(diào)控差異表達(dá)miRNA的靶基因預(yù)測(cè)及功能驗(yàn)證本試驗(yàn)在高通量測(cè)序篩選差異表達(dá)miRNA的基礎(chǔ)上,對(duì)顯著差異表達(dá)的mi RNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),并結(jié)合miRNA靶基因的GO和KEGG信號(hào)通路功能富集分析探索APS對(duì)睪丸器官功能狀態(tài)的影響。GO和KEGG信號(hào)通路功能富集分析發(fā)現(xiàn),篩選到的差異表達(dá)miRNA可調(diào)控睪丸的物質(zhì)代謝過(guò)程,包括核苷酸代謝(GO:0009117),蛋白水解的調(diào)節(jié)(GO:0030162),磷脂的生物合成過(guò)程(GO:0008654),丙酸代謝(ko00640),脂肪酸代謝(ko00071),以及包括半胱氨酸和蛋氨酸代謝(ko00270)和煙酸和煙酰胺代謝(ko00760)在內(nèi)的一碳單位代謝過(guò)程等代謝途徑(ko01100),這些代謝都與睪丸發(fā)育和功能發(fā)揮密切相關(guān)。與此同時(shí),我們發(fā)現(xiàn)APS可影響睪丸組織“自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用”這一信號(hào)通路。通過(guò)miRNA-gene網(wǎng)絡(luò)圖分析發(fā)現(xiàn)gga-miR-16在該通路中發(fā)揮著重要作用。我們通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)該通路中miR-16調(diào)控的4個(gè)靶基因在睪丸的表達(dá)水平,結(jié)果顯示,相較于Control組,IFNGR2和MAP2K1表達(dá)顯著降低(P0.05),MAP2K2表達(dá)顯著增加(P0.05)而SH3BP2無(wú)明顯差異(P0.05)。我們選擇與mi R-16表達(dá)作用模式相符的IFNGR2和MAP2K1作為gga-miR-16的潛在靶基因來(lái)進(jìn)行后續(xù)的雙熒光素酶報(bào)告檢測(cè),結(jié)果表明,相較于Control組及陰性對(duì)照組(mimic-NTC組),miR-16-5p mimic轉(zhuǎn)染細(xì)胞后p2-IFNGR2和p2-MAP2K1重組質(zhì)粒的螢火蟲(chóng)熒光素酶活性與海腎熒光素酶活性比值顯著降低(P0.05),表明miR-16-5p可有效結(jié)合到IFNGR2和MAP2K1 3’UTR區(qū)的靶位點(diǎn)。結(jié)合雙熒光素酶報(bào)告檢測(cè)及靶基因表達(dá)量的在體驗(yàn)證結(jié)果,表明APS可通過(guò)下調(diào)miR-16-5p的表達(dá)進(jìn)而上調(diào)IFNGR2和MAP2K1基因的表達(dá)。綜上,本研究表明種公雞日糧中添加10 g/kg APS可顯著影響種公雞睪丸中mi RNA的表達(dá),其差異表達(dá)miRNA可調(diào)控睪丸物質(zhì)代謝及免疫調(diào)控過(guò)程,且可通過(guò)下調(diào)miR-16-5p的表達(dá)進(jìn)而上調(diào)IFNGR2和MAP2K1的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：APS miRNA IFNGR2 MAP2K1 睪丸 種公雞
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S831
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-22
• 1.1 APS的生物活性12-15
• 1.1.1 APS的免疫調(diào)控活性12-13
• 1.1.2 APS的抗炎活性13
• 1.1.3 APS的抗氧化作用13-14
• 1.1.4 APS的抗病毒、抗腫瘤作用14
• 1.1.5 APS對(duì)機(jī)體物質(zhì)代謝的調(diào)控作用14-15
• 1.2 營(yíng)養(yǎng)表觀(guān)遺傳15-18
• 1.2.1 營(yíng)養(yǎng)與DNA甲基化15
• 1.2.2 營(yíng)養(yǎng)與組蛋白修飾15-16
• 1.2.3 營(yíng)養(yǎng)與miRNA16-18
• 1.3 睪丸組織RNA研究進(jìn)展18-20
• 1.3.1 睪丸組織結(jié)構(gòu)和功能18
• 1.3.2 睪丸miRNA表達(dá)的特征18-19
• 1.3.3 睪丸miRNA的表達(dá)調(diào)控19-20
• 1.4 研究問(wèn)題的提出、研究?jī)?nèi)容及技術(shù)路線(xiàn)20-22
• 1.4.1 研究問(wèn)題的提出20
• 1.4.2 研究?jī)?nèi)容20-21
• 1.4.3 技術(shù)路線(xiàn)21-22
• 第二章 APS調(diào)控種公雞睪丸組織miRNA的差異表達(dá)22-35
• 2.1 材料與方法22-25
• 2.1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及樣品采集22
• 2.1.2 小RNA文庫(kù)的制備22-23
• 2.1.3 測(cè)序結(jié)果生物信息分析23
• 2.1.4 篩選差異表達(dá)miRNA分析23
• 2.1.5 miRNA的RT-qPCR定量驗(yàn)證23-25
• 2.2 結(jié)果與分析25-31
• 2.2.1 總RNA質(zhì)量檢測(cè)25
• 2.2.2 小RNA文庫(kù)測(cè)序結(jié)果生物信息分析25-28
• 2.2.3 APS調(diào)控種公雞睪丸miRNA的差異表達(dá)分析28-31
• 2.2.4 實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果31
• 2.3 討論31-34
• 2.4 小結(jié)34-35
• 第三章 APS調(diào)控差異表達(dá)miRNA靶基因預(yù)測(cè)及功能驗(yàn)證35-56
• 3.1 材料與方法35-42
• 3.1.1 差異表達(dá)miRNA靶基因預(yù)測(cè)和功能注釋35
• 3.1.2 miR-16靶基因在體驗(yàn)證35-37
• 3.1.3 psiCHECK2靶基因雙熒光素酶報(bào)告基因載體構(gòu)建37-40
• 3.1.4 HEK 293T細(xì)胞培養(yǎng)40
• 3.1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染40-41
• 3.1.6 雙熒光素報(bào)告基因檢測(cè)41-42
• 3.2 結(jié)果與分析42-53
• 3.2.1 差異表達(dá)miRNA靶基因預(yù)測(cè)42
• 3.2.2 靶基因GO和KEGG富集性分析42-48
• 3.2.3 與自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性相關(guān)的miR-16靶基因在體驗(yàn)證48
• 3.2.4 靶基因psiCHECK-2 載體的鑒定48-51
• 3.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果51-52
• 3.2.6 雙熒光素酶活性檢測(cè)52-53
• 3.3 討論53-55
• 3.4 小結(jié)55-56
• 第四章 總體結(jié)論與建議56-57
• 4.1 本研究的主要結(jié)論56
• 4.2 有待進(jìn)一步研究的問(wèn)題56-57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 附錄65-69
• 致謝69-70
• 作者簡(jiǎn)介70

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 朱秀增;淺談種公雞的營(yíng)養(yǎng)[J];中國(guó)家禽;2001年01期

2 張光宏,周茂利,柳曉燕;提高種公雞利用率的措施[J];山東畜牧獸醫(yī);2001年03期

3 蘭世杰,張緒國(guó),韓晨光;種公雞的特殊飼養(yǎng)方法[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn);2002年06期

4 陳曉浪;肉用種公雞的管理要求和方法[J];中國(guó)家禽;2003年12期

5 邢攸荷;淺談如何養(yǎng)好肉用種公雞[J];農(nóng)村實(shí)用技術(shù)與信息;2004年09期

6 翟洪民;選用好采精種公雞[J];湖南農(nóng)業(yè);2005年12期

7 ;種公雞的管理技巧[J];中國(guó)畜禽種業(yè);2005年05期

8 邢攸荷;淺談如何養(yǎng)好肉用種公雞[J];養(yǎng)禽與禽病防治;2005年03期

9 張捷;Lindsay Broadbent;;種公雞的管理[J];國(guó)外畜牧學(xué)(豬與禽);2006年03期

10 張偉;張克英;;鋅對(duì)肉用種公雞生長(zhǎng)發(fā)育期性成熟的影響[J];黑龍江動(dòng)物繁殖;2007年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 侯燕平;張建新;賀俊平;;硒微量元素對(duì)種公雞睪丸細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響[A];第十三屆全國(guó)電子顯微學(xué)會(huì)議論文集[C];2004年

2 張偉;張克英;陳代文;余冰;;鋅對(duì)肉用種公雞生殖性能的影響研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)分會(huì)——第九屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

3 解競(jìng)靜;;肉種公雞性行為和攻擊行為神經(jīng)調(diào)控的研究[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

4 吳潔;梁遠(yuǎn)東;李丹;高小芳;祝春三;;日糧鋅水平對(duì)種公雞精液品質(zhì)及血漿、精漿某些生化指標(biāo)參數(shù)的影響[A];中國(guó)家禽科學(xué)研究進(jìn)展——第十四次全國(guó)家禽科學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2009年

5 賀俊平;張建新;侯燕平;;過(guò)量硒對(duì)種公雞睪丸組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的電鏡研究[A];第十二屆全國(guó)電子顯微學(xué)會(huì)議論文集[C];2002年

6 姚會(huì);王曉霞;;能量對(duì)種公雞生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖性能影響的研究進(jìn)展[A];中國(guó)家禽科學(xué)研究進(jìn)展——第十四次全國(guó)家禽科學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2009年

7 梁遠(yuǎn)東;韋頌漢;林鐵昌;韋雄文;張華政;羅元杰;蘇發(fā)錦;韋偉強(qiáng);;限養(yǎng)條件下后備種公雞生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2006年

8 陳合強(qiáng);王宏勝;;AA+種公雞飼養(yǎng)管理中常見(jiàn)的問(wèn)題及預(yù)防措施[A];全球肉雞產(chǎn)業(yè)論壇暨第二屆中國(guó)白羽肉雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展大會(huì)會(huì)刊[C];2010年

9 梁遠(yuǎn)東;高小芳;韋海榮;鞠科;黃鈺鑌;潘福新;徐曉彬;;日糧粗蛋白水平對(duì)廣西三黃雞種公雞繁殖性能及精液品質(zhì)的影響[A];第二屆中國(guó)黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會(huì)會(huì)刊[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 楊冬輝 劉定發(fā) 湖南省南縣畜牧局 陳維;優(yōu)質(zhì)黃雞種公雞的飼養(yǎng)管理[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2006年

2 美國(guó)安偉捷公司北京代表處 韓楓　(編譯);種公雞的管理技巧[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2007年

3 北畜;種公雞的管理[N];東方城鄉(xiāng)報(bào);2007年

4 韓楓;如何管理種公雞[N];山西科技報(bào);2006年

5 韓楓;種公雞管理技巧[N];陜西科技報(bào);2006年

6 韓楓;種公雞的管理[N];陜西科技報(bào);2006年

7 韓楓;如何管理種公雞[N];陜西科技報(bào);2006年

8 美國(guó)安偉捷公司北京代表處 韓楓 編譯;種公雞的管理技巧[N];中國(guó)畜牧報(bào);2005年

9 美國(guó)安偉捷公司北京代表處 韓楓（編譯）;種公雞的管理技巧[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2005年

10 邢攸荷;養(yǎng)好肉用種公雞[N];山西科技報(bào);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 薛夫光;利用iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選與種公雞繁殖力相關(guān)的候選蛋白[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 李玉龍;APS調(diào)控種公雞基因傳代轉(zhuǎn)錄分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

3 孫彤彤;維生素C和維生素E對(duì)氧化應(yīng)激種公雞繁殖性能的調(diào)控[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 陳靜;種公雞弱（無(wú)）精癥發(fā)生的生理與分子機(jī)制初步研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

5 任小春;黃芪多糖調(diào)控種公雞睪丸差異表達(dá)miRNA的鑒定和功能分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

6 張偉;微量元素鋅對(duì)肉用種公雞生殖性能的影響研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

7 譚千洪;維生素C和中草藥添加劑對(duì)夏季種公雞繁殖性能的影響[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 郎俠;飼糧中鋅添加水平對(duì)伊莎父母代種公雞生長(zhǎng)發(fā)育和生殖機(jī)能的影響[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

9 劉紅紅;蜂花粉對(duì)海蘭褐種公雞精液品質(zhì)及生理生化指標(biāo)的影響[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

10 陳曉浪;蜂花粉對(duì)新?lián)P州雞種公雞精液品質(zhì)及相關(guān)生理生化指標(biāo)的影響[D];揚(yáng)州大學(xué);2003年

，

本文編號(hào)：792667