本文關(guān)鍵詞：禽流感H9N2亞型病毒樣顆粒疫苗佐劑的篩選

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【摘要】：為使禽流感H9N2亞型病毒樣顆粒疫苗盡快投入市場,有效防控H9N2禽流感,本課題擬從傳統(tǒng)的白油佐劑、新型的ISA 206佐劑和微球佐劑中篩選出一種最適用于禽流感H9N2亞型病毒樣顆粒疫苗的佐劑。本課題主要內(nèi)容包括以下幾個部分。1禽流感H9N2亞型病毒樣顆粒的制備本試驗首先合成禽流感亞型H9N2病毒的HA基因、NA基因、M1基因,再將這三個基因先后插入桿狀病毒表達載體形成重組質(zhì)粒,重組質(zhì)粒導(dǎo)入感受態(tài)細胞中藍白斑篩選后提取質(zhì)粒進行鑒定。將篩選出的合格的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染sf9昆蟲細胞,經(jīng)過P1代、P2代、P3代轉(zhuǎn)染,最后將P3代繼續(xù)轉(zhuǎn)染sf9昆蟲細胞,最終得到H9N2病毒樣顆粒工作液。結(jié)果顯示:H9N2病毒樣顆粒工作液為透明的淡黃色液體。2白油佐劑、ISA 206佐劑、微球佐劑病毒樣顆粒疫苗的制備與篩選2.1白油佐劑病毒樣顆粒疫苗的制備與篩選本試驗利用本實驗室保存的H9N2亞型病毒樣顆粒工作液,加入不同體積的白油、乳化劑和不同質(zhì)量的硬脂酸鋁采用高速分散器乳化得到不同油水比和不同硬脂酸鋁濃度的白油佐劑H9N2病毒樣顆粒疫苗。本試驗對制備出的白油佐劑疫苗進行了黏度檢驗、穩(wěn)定性檢驗、無菌檢驗和安全性檢驗,結(jié)果顯示:白油佐劑疫苗的穩(wěn)定性檢驗、無菌檢驗和安全性檢驗均合格,油水比為3:1、硬脂酸鋁濃度為0.5%的白油佐劑病毒樣顆粒疫苗最適合用于后續(xù)與其他兩種佐劑之間的篩選。2.2 ISA 206佐劑病毒樣顆粒疫苗的制備與篩選本試驗利用進口佐劑ISA 206按體積比為1:1的比例采用連通管法乳化禽流感H9N2亞型病毒樣顆粒工作液制備出ISA 206佐劑疫苗。本試驗對ISA 206佐劑疫苗進行了黏度檢驗、穩(wěn)定性檢驗、無菌檢驗和安全性檢驗,結(jié)果顯示:ISA 206佐劑H9N2亞型病毒樣顆粒疫苗黏度檢驗、穩(wěn)定性檢驗、無菌檢驗和安全性檢驗均合格,可用于后續(xù)與其他兩種佐劑之間的篩選。2.3微球佐劑病毒樣顆粒疫苗的制備與篩選本試驗利用殼聚糖、吐溫80、硫酸鈉、乙酸為原料制備出微球,與本實驗室保存的H9N2病毒樣顆粒工作液吸附得到微球佐劑疫苗。本試驗為提高微球的載藥量和包封率優(yōu)化了微球與病毒樣顆粒工作液的吸附條件,結(jié)果顯示:微球吸附病毒樣顆粒工作液的最佳時間為3h,5mg微球最佳吸附體積為8m L,載藥量可達89.04%。本試驗對微球佐劑疫苗進行穩(wěn)定性檢驗、無菌檢驗和安全性檢驗。結(jié)果顯示:微球佐劑H9N2病毒樣顆粒疫苗的穩(wěn)定性檢驗、無菌檢驗和安全性檢驗結(jié)果均為合格,可用于后續(xù)與其他兩種佐劑之間的篩選。3不同佐劑禽流感H9N2亞型病毒樣顆粒疫苗免疫效果評定為篩選出禽流感H9N2亞型病毒樣顆粒疫苗的最優(yōu)佐劑,本試驗將試驗雛雞隨機分組并對各組雛雞免疫前后出現(xiàn)的臨床體征、溶菌酶含量、體液免疫水平和細胞免疫水平進行測定。臨床體征檢測包括對各試驗組進行采食量、體溫、呼吸頻率、體重、注射部位是否出現(xiàn)局部或全身反應(yīng),以及各試驗組雛雞精神狀況和排泄物是否正常等方面的檢測。結(jié)果顯示:免疫前后各試驗組食欲無肉眼可見變化;各組試驗蛋雞的體溫、呼吸頻率、體重均無顯著差異(P0.05);白油佐劑疫苗和標準商品化疫苗在注射試驗雛雞后會引起局部反應(yīng);不加佐劑的病毒樣顆粒疫苗組、微球佐劑病毒樣顆粒疫苗組、生理鹽水組、微球佐劑陰性對照組在首次免疫后,其精神狀況比其他各組好。溶菌酶含量的高低是反映動物機體非特異性免疫水平高低的一個指標。對溶菌酶含量的測定結(jié)果顯示:21日齡時,微球佐劑病毒樣顆粒疫苗口服組和微球口服陰性對照組的溶菌酶含量極顯著高于其他組的溶菌酶含量(P0.01),微球佐劑病毒樣顆粒疫苗口服組和微球口服陰性對照組之間無顯著差異(P0.05);14日齡和35日齡時,各組間溶菌酶的含量均無顯著差異(P0.05)。本試驗用甲醛和戊二醛分別制備了醛化紅細胞并測定了其保存時間,結(jié)果顯示:制備的兩種醛化紅細胞存放9個月時,其被H9N2尿囊液凝集的效果與新鮮紅細胞無顯著差異(P0.05);兩種醛化紅細胞放置12個月時,新鮮紅細胞被H9尿囊液凝集的效果極顯著高于醛化紅細胞組(P0.01)。本試驗對免疫后各時期的各試驗組進行了體液免疫水平和細胞免疫水平的測定,結(jié)果顯示:不添加佐劑的病毒樣顆粒進入機體后產(chǎn)生了有效的體液免疫水平,但其持續(xù)時間短、抗體水平低;添加了佐劑的病毒樣顆粒疫苗進入試驗蛋雞機體內(nèi),均產(chǎn)生了有效的體液免疫水平,且它們的持續(xù)時間和抗體水平更長、更高;其中微球佐劑禽流感H9N2亞型病毒樣顆粒疫苗口服組的體液免疫水平比白油佐劑疫苗組、ISA 206佐劑疫苗組和微球佐劑疫苗注射組都要高且持續(xù)時間更長;各試驗組均未產(chǎn)生有效的細胞免疫水平。研究表明:白油佐劑、ISA206佐劑、微球佐劑這三種佐劑中,微球佐劑比其他兩種佐劑更適合用于禽流感H9N2亞型病毒樣顆粒疫苗的佐劑。微球佐劑疫苗口服的免疫途徑比注射的免疫途徑更方便,且能獲得更高的體液免疫水平和更長的持續(xù)時間。
【關(guān)鍵詞】：禽流感 H9N2亞型 病毒樣顆粒 疫苗佐劑
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.4
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 第1章 文獻綜述10-20
• 1 禽流感10-12
• 1.1 病原學(xué)10-11
• 1.2 流行病學(xué)11
• 1.3 抗原變異11-12
• 1.4 防控措施12
• 2 H9N2亞型禽流感臨床癥狀與病理組織學(xué)變化12-13
• 2.1 H9N2亞型禽流感臨床癥狀12
• 2.2 H9N2亞型禽流感病理組織學(xué)變化12-13
• 3 疫苗13-15
• 3.1 傳統(tǒng)疫苗13
• 3.2 新型疫苗13-15
• 4 佐劑15-18
• 4.1 佐劑概述15-16
• 4.2 佐劑分類16-18
• 5 結(jié)語18-20
• 第2章 引言20-22
• 第3章 禽流感H9N2亞型病毒樣顆粒的制備22-26
• 1 材料22
• 2 方法22-24
• 3 結(jié)果24
• 4 討論24-25
• 本章小結(jié)25-26
• 第4章 不同佐劑H9N2亞型VLP疫苗的制備與篩選26-38
• 1 材料26-27
• 2 方法27-30
• 2.1 白油佐劑VLP疫苗的制備與篩選27-28
• 2.2 ISA 206佐劑VLP疫苗的制備與篩選28-29
• 2.3 微球佐劑VLP疫苗的制備與篩選29-30
• 3 結(jié)果30-35
• 3.1 白油佐劑VLP疫苗的制備與篩選結(jié)果30-31
• 3.2 ISA 206佐劑VLP疫苗的制備與篩選結(jié)果31
• 3.3 微球佐劑VLP疫苗的制備與篩選結(jié)果31-35
• 4 討論35-36
• 本章小結(jié)36-38
• 第5章 不同佐劑禽流感H9N2亞型VLP疫苗免疫效果的評定38-58
• 1 材料38-39
• 2 方法39-42
• 2.1 實驗動物和分組39
• 2.2 免疫次數(shù)與途徑39-40
• 2.3 免疫劑量40-41
• 2.4 各試驗組免疫后出現(xiàn)的臨床體征41
• 2.5 溶菌酶含量測定41
• 2.6 體液免疫水平測定41-42
• 2.7 細胞免疫水平測定42
• 3 結(jié)果42-54
• 3.1 免疫前后臨床體征變化情況42-45
• 3.2 溶菌酶含量測定結(jié)果45-46
• 3.3 體液免疫水平測定結(jié)果46-53
• 3.4 細胞免疫水平測定結(jié)果53-54
• 4 討論54-57
• 本章小結(jié)57-58
• 結(jié)論58-60
• 參考文獻60-64
• 附錄64-70
• 致謝70-72
• 在學(xué)期間所發(fā)表的文章72

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1 李姿林;;多基因表達家蠶生物反應(yīng)器組裝甲型H1N1流感病毒樣顆粒的研究[J];北京農(nóng)業(yè);2011年03期

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4 宋振輝;卿家超;買買提·艾孜子;齊曉娟;葉翠芳;;豬傳染性胃腸炎病毒樣顆粒在桿狀病毒表達系統(tǒng)中的體外組裝[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2014年06期

5 王亞君;華育平;;病毒樣顆粒疫苗的研究進展[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2008年08期

6 張國廣;郭遲鳴;歐陽瑩;黃小君;陳亮;;病毒樣顆粒為陽性對照的H5N1實時熒光定量PCR檢測方法的建立[J];廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年03期

7 毛凝;;病毒樣顆粒疫苗的研究及其在動物疫病防控中的應(yīng)用前景[J];農(nóng)業(yè)開發(fā)與裝備;2013年01期

8 張樹梅;黃海碧;顏丕熙;滕巧泱;閆麗萍;徐大偉;呼和巴特爾;李澤君;;影響A型流感病毒樣顆粒包裝及釋放的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)蛋白研究[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年13期

9 王宇;張曉文;王群;梁成珠;汪東風(fēng);;含馬動脈炎病毒N基因的病毒樣顆粒的制備[J];畜牧與獸醫(yī);2014年06期

10 徐志文;郭萬柱;陳楊;朱玲;陳燕凌;王印;;聯(lián)合表達PCV2 ORF2和PPV VP2基因病毒樣顆粒獲得及免疫原性[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2009年07期

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1 陳霄;周子華;廖玉華;王敏;;乙肝核心病毒樣顆粒的克隆、改建、表達和純化[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

2 戚宇華;崔侖標;史智揚;葛以躍;李顯;單軍;陸祖宏;;H5N1禽流感病毒樣顆粒的制備與應(yīng)用[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

3 柯昌文;李天成;武田直和;;BK病毒VP1的C端陽電荷殘基對病毒樣顆粒形成的影響[A];2004年中國科學(xué)院新生病毒性疾病控制學(xué)術(shù)討論會摘要集[C];2004年

4 魏蘭蘭;;16型人乳頭瘤病毒疫苗的研究進展[A];慶祝黑龍江省免疫學(xué)會成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

5 仝光杰;樓覺人;;HPV52 L1蛋白在畢赤酵母中的優(yōu)化表達[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

6 張艷;鄭龍;宋淑霞;魏林;;對攜帶HCC表位的HBc病毒樣顆粒負載的DC疫苗的免疫評價[A];河北省免疫學(xué)會第六次免疫學(xué)大會資料匯編[C];2010年

7 胡仲廉;焉晉絢;查世欽;劉克相;方華;劉靜敏;戈士文;;病毒樣顆�！环N與食管癌密切相關(guān)的實體結(jié)構(gòu)及其立體構(gòu)型[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

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1 通訊員 于洋　記者 張兆軍;病毒樣顆粒熒光示蹤研究獲重要進展[N];科技日報;2011年

2 孫國根;新型HIV—1病毒樣顆粒表達系統(tǒng)制備成功[N];中國醫(yī)藥報;2012年

3 俞忠良;我國克隆出SARS病毒樣顆粒[N];健康報;2003年

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1 李文超;小反芻獸疫病毒樣顆粒的制備及其免疫原性的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

2 楊延麗;滅活病毒及病毒樣顆粒的結(jié)構(gòu)表征和穩(wěn)定性研究[D];中國科學(xué)院研究生院(過程工程研究所);2015年

3 冀顯亮;2009甲型H1N1流感病毒樣顆粒的制備、優(yōu)化及其免疫原性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 陳毅;非對稱垂直流場流分級技術(shù)應(yīng)用于病毒樣顆粒穩(wěn)定性的研究[D];中國科學(xué)院研究生院(過程工程研究所);2016年

5 李月濤;RVFV病毒樣顆粒的構(gòu)建及其免疫原性研究[D];石河子大學(xué);2016年

6 王，

本文編號：791137