本文關(guān)鍵詞：P38MAPK和GCR在糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞GnRH表達(dá)中的作用

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【摘要】：糖皮質(zhì)激素(Glucocorticoid,GC)是一種類固醇激素,其濃度受到下丘腦-垂體-腎上腺(Hypothalamic-pituitary-adrenocoyical axis,HPA)軸的調(diào)控,在維持機(jī)體的穩(wěn)態(tài),調(diào)節(jié)生殖及免疫等功能中發(fā)揮了重要作用。促性腺激素釋放激素(Gonadotropin-relesaing horme,GnRH)是一種10肽激素,是繁殖活動(dòng)最重要的調(diào)節(jié)激素,主要通過下丘腦-垂體-性腺(Hypothalamic-pituitary-gonadal,HPG)軸來對(duì)生殖活動(dòng)進(jìn)行調(diào)控。在應(yīng)激情況下,HPA軸主要通過分泌GC影響HPG軸,從而影響生殖,母畜的生殖能力會(huì)通過此種方式而下降。星形膠質(zhì)細(xì)胞在整個(gè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中占據(jù)重要地位,尤其在生殖、免疫、應(yīng)激等方面。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室已完成的工作中,已經(jīng)在體外證明了星形膠質(zhì)細(xì)胞能夠分泌GnRH,然而其受到哪種信號(hào)通路的調(diào)節(jié)仍然未知。GC-GCR是糖皮質(zhì)激素發(fā)揮經(jīng)典基因組效應(yīng)的系統(tǒng),P38 MAPK是與免疫相關(guān)的最重要信號(hào)通路。但其兩者在星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH中發(fā)揮怎樣的作用,未有相關(guān)資料報(bào)道。因此,在應(yīng)激情況下星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH會(huì)發(fā)生怎樣的變化,星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH會(huì)受到怎樣的調(diào)節(jié)成為了本實(shí)驗(yàn)的研究重點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)利用體外培養(yǎng)的大鼠下丘腦星形膠質(zhì)細(xì)胞,探究P38 MAPK和GCR在糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞的GnRH表達(dá)中的作用,其中主要研究?jī)?nèi)容如下:(1)不同濃度GC對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響;(2)GCR在GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH中的作用;(3)P38 MAPK信號(hào)通路對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響;(4)P38 MAPK下游核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響。(1)為了有效的探究P38 MAPK和GCR在糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞的GnRH表達(dá)中的作用,本實(shí)驗(yàn)采用1~3日齡的雌性SD新生大鼠,培養(yǎng)原代星形膠質(zhì)細(xì)胞,經(jīng)過原代培養(yǎng)、純化和傳代培養(yǎng),獲得所需細(xì)胞,經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)記蛋白-膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色檢驗(yàn)細(xì)胞,所得細(xì)胞的純化率達(dá)99%以上,可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。(2)為了研究不同濃度gc對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌gnrh的影響,以糖皮質(zhì)激素類似物地塞米松(dex)刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞,用10-4mol/l、10-5mol/l、10-6mol/l、10-7mol/l、10-8mol/l的dex分別處理1h、12h、24h、48h后,利用elisa檢測(cè)不同濃度gc對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞gnrh的分泌情況、利用實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)gnrh的mrna轉(zhuǎn)錄水平,并利用westernblot檢測(cè)在各濃度gc處理下gcr的變化情況,結(jié)果顯示,1h、12h、24h、48h時(shí)10-4mol/l、10-5mol/l、10-6mol/l、10-7mol/l、10-8mol/lgc處理組的蛋白及mrna轉(zhuǎn)錄水平均在不同階段顯著高于對(duì)照組(p0.05),gcr在各時(shí)間段中對(duì)10-8mol/l濃度的gc最為敏感,綜合分析確定10-8mol/l的gc為最佳的實(shí)驗(yàn)處理濃度。(3)為了研究gcr在gc刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌gnrh中的作用,通過使用10-8mol/ldex-bsa與dex分別刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞,分別設(shè)置gc-bsa組、gc組和對(duì)照組,用免疫熒光方法檢測(cè)gcr的激活情況,并利用elisa和實(shí)時(shí)熒光定量pcr方法對(duì)各組gnrh分泌量和mrna轉(zhuǎn)錄水平的變化進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,gc組在1h、24h轉(zhuǎn)錄水平顯著高于對(duì)照組(p0.05),12h、24h的蛋白水平顯著高于對(duì)照組證明(p0.05),而gc-bsa組在各時(shí)間段與對(duì)照組相比無顯著性差異,證明當(dāng)gcr激活后能夠促進(jìn)糖皮質(zhì)激素刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞gnrh的分泌。(4)為了研究p38mapk信號(hào)通路是否對(duì)gc刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌gnrh具有調(diào)節(jié)作用,通過使用10μmol/l的p38阻斷劑sb203580及10-8mol/ldex處理,分別設(shè)置p38阻斷劑組、p38阻斷劑+gc組、gc組與對(duì)照組,分別處理1h、12h、24h、48h后,檢測(cè)各組gnrh分泌量、mrna水平的變化及gcr激活情況,結(jié)果顯示在12h、24h時(shí)p38阻斷劑+gc組與gc組的蛋白及轉(zhuǎn)錄水平均顯著高于對(duì)照組(p0.05),且p38阻斷劑+gc組在mrna轉(zhuǎn)錄水平顯著高于gc組(p0.05),而在48h時(shí)p38阻斷劑+gc組仍保持較高的分泌水平顯著高于對(duì)照組(p0.05),而p38阻斷劑組的蛋白與轉(zhuǎn)錄水平在各時(shí)間段與對(duì)照組無顯著性差異,綜上所述表明,在gcr激活后,阻斷p38mapk信號(hào)通路對(duì)gc刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌gnrh具有上調(diào)作用。(5)為了研究p38mapk對(duì)激活下游核轉(zhuǎn)錄因子nf-κb的影響,通過使用10μmol/l的p38阻斷劑sb203580及10-8mol/ldex處理,分別設(shè)置p38阻斷劑組、p38阻斷劑+gc組、gc組與對(duì)照組,分別處理1h、12h、24h、48h后,并通過westernblot檢測(cè)不同時(shí)間nf-κb(p65)磷酸化情況。結(jié)果顯示1h、12h時(shí)gc處理組的磷酸化p65表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組(p0.01),24h時(shí)顯著高于對(duì)照組(p0.05);1h、12h時(shí)p38阻斷劑組、p38阻斷劑+gc組的磷酸化p65表達(dá)量極顯著低于對(duì)照組(P0.01),24 h時(shí)、P38阻斷劑+GC組顯著低于對(duì)照組(P0.05);1 h、12 h時(shí)P38阻斷劑組與P38阻斷劑+GC組的磷酸化P65表達(dá)量無顯著差異(P0.05)。證明經(jīng)GC處理后的星形膠質(zhì)細(xì)胞的磷酸化P65表達(dá)量會(huì)增加,在加入P38阻斷劑后的星形膠質(zhì)細(xì)胞磷酸化P65表達(dá)量會(huì)降低,并且該過程不會(huì)受到GC的刺激而增加。綜上可知,P38 MAPK是引起核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB磷酸化的關(guān)鍵激酶。(6)為了研究P38 MAPK信號(hào)通路下游的NF-κB核轉(zhuǎn)錄因子是否對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH具有調(diào)節(jié)作用,通過使用10μmol/L NF-κB阻斷劑BAY11-7082及10-8 mol/L DEX處理,分別設(shè)置NF-κB阻斷劑組、NF-κB阻斷劑+GC組、GC組與對(duì)照組,分別處理1 h、12 h、24 h、48 h后,檢測(cè)各組GnRH分泌量、mRNA水平的變化及GCR信號(hào)通路激活情況,結(jié)果顯示在12 h、24 h時(shí)NF-κB阻斷劑+GC組、GC組的蛋白水平顯著高于對(duì)照組(P0.05),而NF-κB阻斷劑+GC組在1 h、12 h、24 h、48 h極顯著高于對(duì)照組與GC組(P0.01)結(jié)果證明,在GCR激活后阻斷P38 MAPK信號(hào)通路下游的核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH具有上調(diào)作用。綜上所述,該試驗(yàn)可以得到以下結(jié)果:1、糖皮質(zhì)激素在10-8 mol/L至10-4 mol/L濃度范圍內(nèi),均能促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞中分泌GnRH,且糖皮質(zhì)激素濃度越高這種促進(jìn)分泌作用時(shí)間越長(zhǎng)。2、糖皮質(zhì)激素能夠通過激活GCR促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH。3、當(dāng)GCR激活后,阻斷P38 MAPK-NF-κB信號(hào)通路及對(duì)糖皮質(zhì)激素刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH具有上調(diào)作用,即P38 MAPK-NF-κB信號(hào)通路對(duì)GCR在星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的過程中具有抑制作用。4、GCR在糖皮質(zhì)激素促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH中起到主導(dǎo)作用。
【關(guān)鍵詞】：糖皮質(zhì)激素 星形膠質(zhì)細(xì)胞 P38 MAPK NF-κB
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.2
【目錄】：

• 英文縮略說明7-8
• 摘要8-11
• ABSTRACT11-14
• 第一章 文獻(xiàn)綜述14-22
• 1.1 糖皮質(zhì)激素的作用機(jī)制研究進(jìn)展14-15
• 1.1.1 糖皮質(zhì)激素發(fā)揮功能的經(jīng)典信號(hào)通路14
• 1.1.2 糖皮質(zhì)激素的抗炎機(jī)理及其作用14-15
• 1.1.3 糖皮質(zhì)激素抑制生殖中的機(jī)理15
• 1.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞的重要生理功能研究進(jìn)展15-17
• 1.2.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞在損傷應(yīng)激中的作用16
• 1.2.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞在血腦屏障中的作用16-17
• 1.3 促性腺激素釋放激素及其受體研究進(jìn)展17-19
• 1.3.1 GnRH在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的生理學(xué)功能17-18
• 1.3.2 GnRH受體在機(jī)體的分布情況18-19
• 1.4 P38 MAPK信號(hào)通路與糖皮質(zhì)激素受體（GCR）的關(guān)系19-22
• 1.4.1 P38 MAPK通路在炎癥中的調(diào)節(jié)機(jī)制19
• 1.4.2 糖皮質(zhì)激素受體經(jīng)典通路與P38 MAPK通路的相互作用19-22
• 第二章 引言22-24
• 第三章 實(shí)驗(yàn)材料及方法24-38
• 3.1 試驗(yàn)材料24-28
• 3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物24
• 3.1.2 主要試劑24-25
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器25-26
• 3.1.4 試劑配制26-28
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法28-38
• 3.2.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)28-29
• 3.2.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度鑒定29-30
• 3.2.3 不同濃度GC對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響30-33
• 3.2.4 GCR在GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH中的作用33-34
• 3.2.5 P38 MAPK信號(hào)通路對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響34-35
• 3.2.6 P38 MAPK下游NF-κB對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響35-38
• 第四章 結(jié)果與分析38-58
• 4.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)38-39
• 4.1.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)38-39
• 4.1.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞傳代培養(yǎng)39
• 4.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度鑒定39-40
• 4.3 不同濃度GC對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響40-46
• 4.3.1 ELISA檢測(cè)不同濃度GC對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響40-42
• 4.3.2 RT-PCR檢測(cè)不同濃度GC對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄GnRH mRNA的影響42-44
• 4.3.3 Western Blot檢測(cè)不同濃度GC對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的GCR的影響44-46
• 4.4 GCR在GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH中的作用46-49
• 4.4.1 免疫熒光觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞GCR的激活現(xiàn)象46-48
• 4.4.2 ELISA研究GCR激活后對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響48
• 4.4.3 RT-PCR研究GCR激活后對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄GnRH mRNA的影響48-49
• 4.5 P38 MAPK信號(hào)通路對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響49-54
• 4.5.1 ELISA研究P38 MAPK對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響49-50
• 4.5.2 RT-PCR研究P38 MAPK對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄GnRH mRNA的影響50-51
• 4.5.3 免疫熒光研究P38 MAPK阻斷后對(duì)激活GCR的影響51-53
• 4.5.4 通過Western Blot研究P38 MAPK對(duì)激活下游核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的影響53-54
• 4.6 P38 下游 NF-κB 對(duì) GC 刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌 Gn RH 的影響54-58
• 4.6.1 ELISA研究NF-κB對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的影響54-55
• 4.6.2 RT-PCR研究NF-κB對(duì)GC刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄GnRH mRNA的影響55-56
• 4.6.3 免疫熒光研究NF-κB對(duì)激活星形膠質(zhì)細(xì)胞GCR的影響56-58
• 第五章 分析與討論58-62
• 5.1 關(guān)于GC最佳濃度的探討58
• 5.2 關(guān)于GCR向細(xì)胞核匯聚現(xiàn)象的探討58-59
• 5.3 P38 MAPK信號(hào)通路與GC對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用的關(guān)系59
• 5.4 NF-κB核轉(zhuǎn)錄因子與GC對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用的關(guān)系59-60
• 5.5 選題對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐的作用60-62
• 第六章 結(jié)論62-64
• 參考文獻(xiàn)64-72
• 致謝72-74
• 在讀期間發(fā)表的文章74

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7 記者 班瑋;德國(guó)腦細(xì)胞再生研究取得新進(jìn)展[N];人民日?qǐng)?bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曾招;離子通道TRPM7調(diào)節(jié)細(xì)胞生理的分子機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2014年

2 黃維一;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌因子對(duì)缺血性腦卒中后星形膠質(zhì)細(xì)胞活性及功能的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 楊俊華;星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的ATP促進(jìn)丘腦中的突觸刪除[D];浙江大學(xué);2015年

4 鄧雅婷;龍膽苦苷鎮(zhèn)痛與抗抑郁的中樞作用及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 李新;星形膠質(zhì)細(xì)胞NDRG2在七氟烷預(yù)處理神經(jīng)保護(hù)作用中的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 鐘志宏;亞鐵離子對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷作用及香芹酚在實(shí)驗(yàn)性腦出血中的神經(jīng)保護(hù)作用[D];上海交通大學(xué);2014年

7 張建成;星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的IL-17A對(duì)缺血性腦卒中神經(jīng)再生和功能恢復(fù)的影響及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2015年

8 洪洋;孕酮對(duì)Aβ所致星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

9 凌云志;帕瑞昔布減輕過氧化氫誘導(dǎo)的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用及機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 徐進(jìn);腦出血后星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4內(nèi)化及其機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張麗麗;脂肪基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞過程中線粒體凋亡與自噬的關(guān)系[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 劉峻崎;三種中藥有效成分調(diào)控中風(fēng)后星形膠質(zhì)細(xì)胞的作用及其機(jī)制[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 黃夢(mèng)之;星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)內(nèi)側(cè)膝狀體神經(jīng)元聽反應(yīng)電活動(dòng)的影響[D];杭州師范大學(xué);2016年

4 楊茜;TRIF信號(hào)在原代星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子釋放中的作用及機(jī)制[D];成都醫(yī)學(xué)院;2016年

5 吳思思;全麻藥物對(duì)大鼠外側(cè)前額葉皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞突觸調(diào)控的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

6 謝禮瑋;全麻藥物對(duì)培養(yǎng)大鼠皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞興奮性和遞質(zhì)釋放的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

7 何雯;小花棘豆中苦馬豆素對(duì)羊的毒性作用及大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞影響的研究[D];塔里木大學(xué);2016年

8 裴海霞;TREK-1過表達(dá)與脈絡(luò)寧注射液對(duì)氧糖剝奪星形膠質(zhì)細(xì)胞及其谷氨酸代謝的作用[D];蘭州大學(xué);2016年

9 古玉梅;淫羊藿苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞及軸突的影響[D];廣東藥科大學(xué);2016年

10 李良娟;MAPK-COX路徑在GnRH調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞PGE2表達(dá)中的作用[D];西南大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：784903