本文關鍵詞：Pax6 PAI亞結(jié)構(gòu)域在黑色素細胞中對MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的影響

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【摘要】：【目的】高度保守的PAX轉(zhuǎn)錄因子家族在黑色素細胞的分化和黑色素的生成中起重要的作用,其家族共有的PD結(jié)構(gòu)域是其與下游基因結(jié)合的主要位點,而PD結(jié)構(gòu)域氨基端的PAI亞結(jié)構(gòu)域在其與下游基因的結(jié)合過程中發(fā)揮重要的作用。研究表明Pax6在視網(wǎng)膜上皮黑色素細胞的分化中發(fā)揮至關重要的作用,本試驗借助研究Pax6 PAI亞結(jié)構(gòu)域的功能來對PAX轉(zhuǎn)錄因子家族共有的PD結(jié)構(gòu)域和PAI亞結(jié)構(gòu)域進行研究�！痉椒ā渴紫韧ㄟ^Psipred對Pax6 PD結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)進行分析,使用NCBI對Pax6 PD結(jié)構(gòu)域與下游基因的結(jié)合位點進行分析,使用Jaspar對MITF、TYR、TYRP1和TYRP2啟動子中Pax6 PD結(jié)構(gòu)域可能的作用位點進行預測。使用普通PCR克隆Pax6PAI亞結(jié)構(gòu)域,將其連入T載體,酶切后連入慢病毒載體,并送公司測序確認。將構(gòu)建好的PAI亞結(jié)構(gòu)域過表達載體通過細胞轉(zhuǎn)染導入到培養(yǎng)的小鼠黑色素細胞中,使其過量表達。收集細胞,分別通過觀察綠色熒光蛋白檢測轉(zhuǎn)染效率,使用RT-PCR和Western blot來檢測MITF、TYR、TYRP1和TYRP2在m RNA和蛋白水平的變化,同時檢測黑色素細胞中黑色素生成量的變化�！窘Y(jié)果】通過NCBI分析可知,Pax6 PD結(jié)構(gòu)域與下游基因的作用位點主要集中在氨基端的PAI亞結(jié)構(gòu)域。通過Jaspar預測分析,得知,MITF啟動子-695處存在Pax6 PD結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點,TYR啟動子-873和-1133處存在Pax6 PD結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點,TYRP1啟動子-629處存在Pax6 PD結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點,TYRP2啟動子-655處存在Pax6 PD結(jié)構(gòu)域的結(jié)合位點。在黑色素細胞中過表達Pax6 PAI亞結(jié)構(gòu)域后,與空載組相比,試驗組MITF m RNA升高2.05倍(P0.01),蛋白質(zhì)升高1.7倍(P0.01);TYR m RNA升高2.09倍,蛋白質(zhì)升高2倍(P0.05);TYRP1 m RNA升高2.93倍(P0.05),蛋白質(zhì)升高1.9倍(P0.01);TYRP2 m RNA升高3.62倍(P0.01),蛋白質(zhì)升高1.37倍。同時試驗組的黑色素含量是空載組黑色素含量的1.33倍(P0.001)�！窘Y(jié)論】在小鼠黑色素細胞中,過表達Pax6 PAI亞結(jié)構(gòu)域可以促進MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的表達,進而使黑色素細胞黑色素的生成量增加。
【作者單位】： 山西農(nóng)業(yè)大學動物科技學院;山西醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院;
【關鍵詞】： PAI亞結(jié)構(gòu)域 Pax 黑色素
【基金】：國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃,2013AA102506) 國家公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201303119) 山西農(nóng)業(yè)大學創(chuàng)新團隊建設計劃項目(CXTD201201)
【分類號】：S852.2
【正文快照】： homeodomain(HD)的完整分子結(jié)構(gòu)執(zhí)行其功能,而0引言且每一個亞結(jié)構(gòu)域也有其獨特的功能[8]�！颈狙芯壳小狙芯恳饬x】哺乳動物皮膚黑色素細胞是由神經(jīng)入點】Pax6已被證明在黑色素細胞的分化和黑色素嵴祖細胞定向分化而來[1],其正常分化依靠相關基因的生成中發(fā)揮重要作用[12-13]

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1 崔嘉;孫守榮;苗魯旭;席冬梅;何奕多;毛華明;鄧衛(wèi)東;;TYRP1基因控制動物色素形成的研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2009年09期

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1 徐瑩;TYR、TYRP1基因與朝鮮鵪鶉羽色相關性研究[D];河南科技大學;2014年

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本文編號：705980