本文關鍵詞：IBV雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立及免疫膠體金試紙條的研制

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【摘要】：本試驗用辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)對單克隆抗體11C10進行標記,將單克隆抗體2D6包被于酶標板上,建立了用抗體2D6和11C10夾心檢測雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus, IBV)的酶聯(lián)免疫吸附檢測方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),并對建立的ELISA方法中各步反應的條件進行了優(yōu)化。通過驗證結(jié)果顯示,建立的雙抗體夾心ELISA檢測方法檢測雞傳染性支氣管炎病毒時檢測結(jié)果呈陽性而在檢測其他雞的傳染病病毒時結(jié)果呈陰性;將雞傳染性支氣管炎病毒尿囊液稀釋160倍后,建立的雙抗體夾心ELISA檢測方法仍能夠檢測得到。運用雙抗體夾心的原理,制備了粒徑為25nm的膠體金溶液,用膠體金溶液標記純化過的單克隆抗體11C10后將其吸附于玻璃纖維膜上作為金標墊;將單克隆抗體2D6和羊抗鼠二抗印跡于層析膜上做檢測線和質(zhì)控線：將金標墊、層析膜和吸水紙等按順序組裝研制了檢測雞傳染性支氣管炎病毒的膠體金免疫層析快速檢測試紙條。并對試紙條制備過程中金標抗體稀釋液、金標抗體稀釋度、包被抗體稀釋度和羊抗鼠二抗稀釋度等條件進行了優(yōu)化,初步研制出能夠快速檢測雞傳染性支氣管炎病毒的試紙條,試紙條能夠檢測稀釋80倍后的病毒尿囊液且檢測其他病毒結(jié)果呈陰性。用研制的試紙條和雙抗體夾心ELISA方法同時檢測55份疑似感染IB的雞口咽拭子樣品,結(jié)果表明,雞傳染性支氣管炎病毒免疫膠體金診斷試紙條檢測結(jié)果與雙抗體夾心ELISA檢測結(jié)果符合率較高達到92.73%,具有操作方便并且現(xiàn)場結(jié)果顯示快速的優(yōu)點,在IBV的臨床快速檢測方面具有重要意義。
【關鍵詞】：雞傳染性支氣管炎 ELISA 膠體金
【學位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.4
【目錄】：

• 摘要7-8
• 前言8-17
• 1 傳染性支氣管炎概述8-13
• 1.1 病原學8-9
• 1.2 IBV基因組結(jié)構(gòu)特征9
• 1.3 IBV的結(jié)構(gòu)蛋白及生物學功能9-11
• 1.4 IB的臨床癥狀分型及其剖檢變化11-12
• 1.5 IB的診斷12-13
• 2 免疫膠體金技術13-17
• 2.1 膠體金概述13-14
• 2.2 免疫膠體金概述14
• 2.3 免疫膠體金檢測技術14-17
• 第一章 IBV雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立17-26
• 1 材料與方法17-20
• 1.1 材料、儀器及主要試劑17-18
• 1.2 試驗方法18-20
• 2 結(jié)果與分析20-24
• 2.1 IBV抗原的制備20-21
• 2.2 抗體的純化21
• 2.3 雙抗體夾心ELISA最佳操作條件的優(yōu)化21-22
• 2.4 臨界值的確定22-23
• 2.5 ELISA重復性、敏感性、特異性的確定23-24
• 3 討論24-25
• 3.1 樣本的影響24
• 3.2 材料、試劑的影響24
• 3.3 加樣24
• 3.4 洗板24-25
• 3.5 溫育25
• 3.6 顯色與結(jié)果判定25
• 4 小結(jié)25-26
• 第二章 IBV膠體金免疫檢測試紙條的研制26-39
• 1 材料與方法26-32
• 1.1 材料與試劑26
• 1.2 試驗方法26-32
• 2 試驗結(jié)果32-36
• 2.1 膠體金的制備32
• 2.2 膠體金標記抗體32-33
• 2.3 金標墊的制備33
• 2.4 硝酸纖維膜上單抗和二抗包被濃度的優(yōu)化33-34
• 2.5 膠體金免疫層析試紙條性能評價34-36
• 2.6 膠體金試紙條與雙抗體夾心ELISA檢測方法檢測臨床樣品的比較36
• 3 討論36-38
• 3.1 膠體金的制備36-37
• 3.2 抗體的標記37
• 3.3 金標墊的制備37
• 3.4 試紙條與其他方法的比較37-38
• 3.5 試紙條的應用38
• 4 小結(jié)38-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-44
• Abstract44-46
• 致謝46

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本文編號：581850