本文關鍵詞：不同脂肪酸對下丘腦N38細胞AgRP表達和分泌的影響及其信號通路，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：采食量是影響動物生產性能的重要因素之一。目前認為,下丘腦食欲中樞的信號整合在“食欲調控網絡”中扮演著重要的作用。下丘腦弓狀核促采食神經元能夠感應營養(yǎng)物質如葡萄糖、脂肪酸和氨基酸等濃度的變化,從而刺激AgRP蛋白的表達和分泌,參與控制采食和能量平衡。迄今為止,不同脂肪酸對動物采食調控的影響及其機制還不是很清楚。為此,本研究在細胞水平上,以小鼠下丘腦N38細胞為模型,采用Western Blot技術檢測不同脂肪酸作用下AgRP蛋白的表達及分泌情況,采用定量PCR技術檢測AgRP、CD36以及代謝相關基因mRNA的表達水平,并采用RNA干擾和受體激動劑處理等方法研究和比較不同脂肪酸對炎癥信號通路及胰島素、瘦素信號通路變化的影響。研究結果如下:(1)不同的脂肪酸對N38細胞AgRP的表達和分泌具有不同的影響。其中,100μM的丁酸及油酸、棕櫚酸對N38細胞AgRP的表達和分泌無顯著影響;而100μM月桂酸、辛酸以及硬脂酸、肉豆蔻酸能夠顯著促進AgRP蛋白的表達和分泌(P0.05);而100μM的亞油酸能夠抑制AgRP蛋白的表達及分泌(P0.05)。(2)10μM和50μM的亞油酸能顯著抑制N38細胞AgRP蛋白的分泌,當濃度增加到100及300μM時,還能夠顯著抑制AgRP蛋白的表達(P0.05);硬脂酸及月桂酸在10、50及100μM均能顯著促進AgRP蛋白的表達和分泌(P0.05)。(3)100μM亞油酸與LPS共處理后,顯著逆轉了TLR4蛋白及TLR4依賴的炎癥通路蛋白JNK/IKKα/β的抑制效應(P0.05);干擾TLR4后,硬脂酸顯著逆轉了蛋白TLR4及TLR4依賴的JNK蛋白的表達;而月桂酸也能夠逆轉TLR4及IKKα/β的促進效應(P0.05)。表明TLR4通路參與介導了上述脂肪酸對N38細胞AgRP表達和分泌的調節(jié)作用。(4)100μM亞油酸能顯著增加N38細胞胰島素及瘦素通路的敏感性(P0.05),與LPS共處理后,胰島素及瘦素通路的敏感性降低,從而逆轉了AgRP的抑制作用;而100μM的硬脂酸能顯著抑制胰島素及瘦素信號通路(P0.05),干擾TLR4受體后,顯著逆轉了IRS/Akt/Fox O1及JAK2/STAT3蛋白降低的效應(P0.05),從而抑制了AgRP蛋白的促進作用;100μM月桂酸對胰島素及瘦素通路無顯著影響。(5)100μM的亞油酸能夠顯著降低代謝相關基因CPT1/FAS的表達量,而顯著增加CD36 mRNA的表達量(P0.05);硬脂酸能夠顯著增加CPT1/FAS及CD36的表達量(P0.05);100μM的月桂酸對ACCα/FAS/CPT1/UCP2及CD36的表達量均無顯著影響。綜上所述,不飽和脂肪酸——亞油酸能夠TLR4依賴性地抑制炎癥通路蛋白的表達,促進胰島素及瘦素的敏感性,從而降低AgRP蛋白的表達及分泌;而飽和脂肪酸——硬脂酸及月桂酸則通過TLR4介導,促進炎癥通路蛋白的表達,抑制胰島素及瘦素的敏感性,從而增加AgRP的表達及分泌。同時,亞油酸及硬脂酸也可能通過CD36及代謝通路影響AgRP神經元的活性。
【關鍵詞】：采食調控 炎癥 亞油酸 硬脂酸 月桂酸
【學位授予單位】：華南農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S816
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 1 前言11-19
• 1.1 下丘腦采食調控相關神經元對采食的影響11-12
• 1.2 脂肪酸對動物采食的影響12-13
• 1.3 脂肪酸影響采食調控的作用機制13-18
• 1.3.1 脂肪酸轉運體及脂肪酸能量代謝機制14-15
• 1.3.2 脂肪酸受體15-16
• 1.3.3 TLR4介導的炎癥信號通路16-18
• 1.4 研究目的與意義18-19
• 2 材料與方法19-29
• 2.1 材料19-22
• 2.1.1 主要儀器與設備19
• 2.1.2 試驗用品及耗材19
• 2.1.3 主要試劑19-20
• 2.1.4 試驗用品的清洗及消毒20
• 2.1.5 主要試劑的配制20-22
• 2.1.6 試驗細胞22
• 2.2 試驗方法22-29
• 2.2.1 N38細胞的復蘇及培養(yǎng)22-23
• 2.2.2 N38細胞的處理23
• 2.2.3 細胞內總蛋白的測定23-24
• 2.2.4 細胞上清的處理24
• 2.2.5 Western Blot檢測24-26
• 2.2.6 N38細胞總RNA的提取、反轉錄及PCR擴增26-29
• 2.3 數據統(tǒng)計29
• 3 結果與分析29-39
• 3.1 不同脂肪酸對N38細胞AgRP蛋白表達及分泌的影響29-30
• 3.2 亞油酸及硬脂酸對N38細胞AgRP蛋白表達及分泌的劑量效應30-31
• 3.3 亞油酸及硬脂酸調節(jié)N38細胞AgRP蛋白表達及分泌的作用機制31-36
• 3.3.1 亞油酸及硬脂酸對N38細胞炎癥通路相關蛋白表達的影響31-32
• 3.3.2 亞油酸通過抑制TLR4依賴的炎癥通路來降低N38細胞AgRP的表達和分泌32
• 3.3.3 硬脂酸通過促進TLR4依賴的炎癥通路來增加N38細胞AgRP的表達和分泌32-34
• 3.3.4 亞油酸及硬脂酸對胰島素、瘦素通路蛋白表達的影響34-36
• 3.4 月桂酸對N38細胞AgRP蛋白表達及分泌的影響36-38
• 3.4.1 月桂酸對N38細胞AgRP蛋白表達及分泌的劑量效應36
• 3.4.2 月桂酸對N38細胞炎癥通路相關蛋白表達的影響36-37
• 3.4.3 月桂酸通過促進TLR4依賴的炎癥通路來增加N38細胞AgRP的表達和分泌37
• 3.4.4 月桂酸對胰島素、瘦素通路蛋白表達的影響37-38
• 3.5 亞油酸、硬脂酸及月桂酸對脂肪酸代謝相關基因mRNA表達的影響38-39
• 4 討論與結論39-45
• 4.1 脂肪酸對下丘腦N38細胞AgRP蛋白表達及分泌的影響39-40
• 4.2 脂肪酸對下丘腦N38細胞食欲調控的影響及其作用機制40-42
• 4.2.1 TLR4介導的炎癥通路40-41
• 4.2.2 胰島素及瘦素信號通路41-42
• 4.3 脂肪酸轉運體及脂肪酸代謝對下丘腦N38細胞食欲調控的影響42-44
• 4.4 結論44-45
• 致謝45-46
• 參考文獻46-54

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

1 Songbo Wang;Paul Khondowe;Shengfeng Chen;Jianjian Yu;Gang Shu;Xiaotong Zhu;Lina Wang;Ping Gao;Qianyun Xi;Yongliang Zhang;Qingyan Jiang;;Effects of “Bioactive” amino acids leucine, glutamate, arginine and tryptophan on feed intake and mRNA expression of relative neuropeptides in broiler chicks[J];Journal of Animal Science and Biotechnology;2012年04期

2 盧伊娜;胡慧;朱維良;王賀瑤;;GPR120的研究進展[J];生命科學;2008年02期

3 Praveen K Roy;Farzana Rashid;Jack Bragg;Jamal A Ibdah;;Role of the JNK signal transduction pathway in inflammatory bowel disease[J];World Journal of Gastroenterology;2008年02期

  本文關鍵詞：不同脂肪酸對下丘腦N38細胞AgRP表達和分泌的影響及其信號通路，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：509040