發(fā)布時間：2017-06-27 03:09

  本文關鍵詞：雞TAP基因變異及其與馬立克氏病的相關性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：抗原處理相關轉運體(Transporter associated with antigen processing,TAP)屬于ATP結合盒式蛋白(ATP-binding cassette transporter,ABC)超家族。TAP在MHC-I類分子的成熟及膜表面表達中起著十分重要的作用,MHC-I分子在病毒感染的免疫應答反應中和通過與抗原肽結合并將其遞呈到細胞毒性T淋巴細胞(CTL)來轉化細胞中發(fā)揮重要作用。當TAP功能障礙或表達下降時都將導致腫瘤抗原不能被有效地轉運,從而導致腫瘤逃避免疫監(jiān)視。TAP基因的功能在人類和哺乳動物疾病中研究較多,與禽類疾病的相關性研究較少。馬立克氏病(MD)是由皰疹病毒2或MD病毒(MDV)引起的雞的一種毀滅性的腫瘤性病毒病,對世界各地的家禽業(yè)均造成過重大經濟損失,而且MDV的毒力在不斷地增加,通過疫苗途徑不能有效地預防和控制,需要通過基因手段來檢測、有針對性地治療和預防。本研究的目的是檢測濟寧百日雞、壽光雞、SPF雞中TAP基因的變異及其與馬立克氏病的相關性。本研究首先運用分子遺傳標記技術,檢測了濟寧百日雞、壽光雞、SPF雞的TAP基因的多態(tài)性,統(tǒng)計分析了不同基因型與MD的相關性,結果發(fā)現(xiàn)TAP1-3、TAP1-4、TAP2-2和TAP2-3引物擴增產物有多態(tài)基因型。進一步對三個品種的雞群進行了實驗室攻毒試驗,統(tǒng)計分析了TAP特異性片段上的變異位點,繼而分別在濟寧百日雞、壽光雞、SPF雞的TAP1特異性片段上依次發(fā)現(xiàn)了18個、14個、16個變異位點,在濟寧百日雞、壽光雞、SPF雞的TAP2特異性片段上分別發(fā)現(xiàn)了12個、14個、13個變異位點。對變異位點進行統(tǒng)計分析,發(fā)現(xiàn)TAP1有4個變異位點可以導致氨基酸的改變,TAP2上有7個變異位點可以導致氨基酸的改變。對TAP的變異位點與馬立克氏病的相關性進行研究,發(fā)現(xiàn)有24個變異位點與馬立克氏病有關,其中JB1323、JB1050、JB1148、SG1303、SPF1082、SPF1196位點與馬立克氏病的易感性有顯著相關(P0.05)。進一步對6個變異位點的不同基因型進行遺傳模式分析,發(fā)現(xiàn)JB1323和JB1050是馬立克氏病的易感高風險突變位點,JB1323位點的(C→T)可引起氨基酸的改變,由丙氨酸轉變?yōu)槔i氨酸;JB1050位點(G→T)使得丙氨酸變?yōu)榻z氨酸。為了進一步了解TAP表達量與MD的相關性,采用熒光定量PCR技術研究了TAP基因的變異位點JB1323和JB1050的不同基因型所在的個體中TAP的表達量,結果發(fā)現(xiàn),TAP的表達量在JB1323位點處易感的純合體中比野生純合體的低,在JB1050位點處雜合體中比純合體的低,但差異不顯著(P0.05)。感染馬立克氏病病毒后TAP1的表達量在心臟、肝臟均顯著升高,TAP1在脾臟中表達量顯著下降,在腎臟、肺臟中TAP1表達量變化不顯著。對TAP2表達量的檢測發(fā)現(xiàn),在脾臟中,TAP2在抗病組中相對表達量顯著下降。進一步對雞脾臟中TAP表達量進行了分析,發(fā)現(xiàn)感染馬立克氏病病毒后TAP在脾臟中表達量有先增加、后下降的變化規(guī)律,說明TAP表達量升高可以作為馬立克氏病感染初期的一個標志性指標,用于檢測馬立克氏病。
【關鍵詞】：MD TAP1 TAP2 雞 變異位點 攻毒實驗
【學位授予單位】：山東農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 英文縮略詞4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-23
• 1.1 MHC的研究進展11-13
• 1.1.1 MHC的結構與功能11-12
• 1.1.2 MHC與疾病相關性的研究進展12-13
• 1.2 抗原處理相關轉運體的研究進展13-17
• 1.2.1 TAP基因結構13-15
• 1.2.2 TAP的轉運機制15
• 1.2.3 TAP基因的多態(tài)性研究進展15-17
• 1.2.4 TAP表達量與疾病相關性的研究進展17
• 1.3 馬立克氏病的研究進展17-20
• 1.3.1 MDV的研究進展18-19
• 1.3.2 馬立克氏病的病理學研究進展19-20
• 1.4 山東地方雞種質資源20-21
• 1.4.1 濟寧百日雞種質特性研究現(xiàn)狀20
• 1.4.2 壽光雞種質特性研究現(xiàn)狀20-21
• 1.5 分子遺傳標記技術21-22
• 1.5.1 單鏈構象多態(tài)性技術（SSCP）21
• 1.5.2 單核苷酸多態(tài)性（SNP）21-22
• 1.6 本研究的目的與意義22-23
• 2 材料與方法23-38
• 2.1 試驗材料23-26
• 2.1.1 試驗動物和毒株23
• 2.1.2 試驗試劑與來源23-24
• 2.1.3 主要儀器與來源24
• 2.1.4 數據庫和軟件24
• 2.1.5 實驗所用試劑的配置24-26
• 2.2 試驗方法26-38
• 2.2.1 三種雞的TAP基因多態(tài)性分析26-31
• 2.2.2 TAP1和TAP2特異性片段與MD的相關性分析31-35
• 2.2.3 雞TAP表達量與馬立克氏病的相關性分析35-38
• 3 結果與分析38-72
• 3.1 三種雞的TAP基因多態(tài)性檢測結果38-40
• 3.1.1 三種雞的DNA提取和質量檢測結果38
• 3.1.2 三種雞的TAP1和TAP2基因的PCR結果38-39
• 3.1.3 三種雞TAP1和TAP2多態(tài)性分析39-40
• 3.2 三種雞TAP1和TAP2的特異性片段與馬立克氏病的相關分析40-66
• 3.2.1 三種雞TAP1和TAP2的特異性片段的PCR擴增40-41
• 3.2.2 三種雞TAP1和TAP2特異性片段的變異位點克隆測序結果41-43
• 3.2.3 三種雞的TAP基因的多態(tài)位點的遺傳分析43-52
• 3.2.4 變異位點對應的氨基酸比對結果52
• 3.2.5 導致氨基酸變化的變異位點導致的蛋白質變化分析52-54
• 3.2.6 所有變異位點的等位基因頻率的χ2 檢驗54-61
• 3.2.7 變異位點與馬立克氏病抗性的相關性分析61-66
• 3.3 TAP的表達量分析66-72
• 3.3.1 濟寧百日雞的總RNA提取結果66
• 3.3.2 持家基因與目的基因的PCR結果檢測66-67
• 3.3.3 TAP1、TAP2和β-actin的擴增曲線、標準曲線和熔解曲線67-69
• 3.3.4 TAP在濟寧百日雞內臟組織里的相對表達量69-71
• 3.3.5 TAP在1323位點、1050 位點不同基因型中的表達量71-72
• 4 討論72-77
• 4.1 三種雞TAP1和TAP2基因的多態(tài)性72-74
• 4.2 TAP多態(tài)性與馬立克氏病的相關性74-75
• 4.3 TAP表達量與馬立克氏病的相關性75-77
• 5 結論77-78
• 參考文獻78-89
• 致謝89

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