本文關(guān)鍵詞：玉米赤霉烯酮對雄性小鼠血睪屏障的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：世界范圍內(nèi)受霉菌毒素污染的農(nóng)作物越來越多,其中玉米赤霉烯酮是最具農(nóng)業(yè)經(jīng)濟重要性的霉菌毒素之一。不僅能夠引起機體各系統(tǒng)的疾病,還會降低畜牧生產(chǎn),增加衛(wèi)生保健和獸醫(yī)醫(yī)療的投入。近年來,玉米赤霉烯酮的生殖毒性受到國內(nèi)外廣泛的關(guān)注,血睪屏障是當前研究外源性毒物對雄性生殖損害的熱點問題。ZEN對雄性的生殖毒性是否是通過破壞血睪屏障,其毒性作用機制需要進一步的探究討論。急性攻毒試驗選取清潔級昆明系8周齡雄性小鼠95只,隨機分成五組：25 mg/kg、50 mg/kg、75 mg/kg ZEN處理組、溶劑對照組、空白對照組,進行腹腔注射染毒,每天一次,連續(xù)5天,于末次染毒24小時后摘眼球采血并脫頸處死動物,分離睪丸和附睪,測定臟器系數(shù)、精液品質(zhì),睪丸酶的活力以及血清睪酮和雌激素的質(zhì)量濃度,qPCR檢測Vim、Cldn11和N-cad mRNA的表達水平。慢性攻毒試驗選取清潔級昆明系8周齡雄性小鼠75只,隨機分成五組：25 mg/kg、50 mg/kg、75 mg/kg ZEN處理組、溶劑對照組、空白對照組,經(jīng)口途徑染毒28天,處死動物后,除了檢測上述指標,還測定肝腎功能指標,制作睪丸組織切片,qPCR檢測Vim、Cldn11、N-cad、StAR和Cyp11al mRNA的表達水平。急性攻毒結(jié)果顯示：與對照組相比,ZEN顯著地降低小鼠的體重和精液品質(zhì),睪丸乳酸脫氫酶(LDH)、堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)的活力隨著染毒劑量的增加顯著升高,血清睪酮和雌激素濃度顯著下降,RT-PCR結(jié)果表明Vim和Cldn11相對表達量呈上升趨勢,N-cad的表達下調(diào)。慢性攻毒結(jié)果顯示：與對照組相比,ZEN顯著地降低精液品質(zhì)和血清睪酮和雌激素質(zhì)量濃度,損害肝腎功能,堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)的活力略有上升,睪丸乳酸脫氫酶(LDH)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)呈下降趨勢,高劑量組的睪丸病理切片可見生精細胞減少、排列混亂,RT-PCR結(jié)果表明Vim、StAR和Cyp11al的表達下調(diào),而Cldn11和N-cad的相對表達量略有上升。以上結(jié)果表明：ZEN急性和慢性攻毒作用均能夠顯著降低雄性小鼠的精子品質(zhì),以及血清睪酮和雌二醇的質(zhì)量濃度,影響睪九標志酶的活力。ZEN急性攻毒作用能夠上調(diào)Vim和Cldn11 mRNA的表達,下調(diào)N-cad的表達,這可能與機體自愈性的適應(yīng)機制有關(guān),通過加強關(guān)鍵性基因的表達,延長血睪屏障的重建周期,以保護生精細胞免受外源性毒物的侵害。ZEN慢性攻毒作用能夠下調(diào)Vim. StAR和Cyp11al mRNA的表達,Cldn11和N-cad隨著染毒劑量的增加呈現(xiàn)上升的趨勢,這表明ZEN對血睪屏障造成嚴重的損害,通過機體自愈適應(yīng)性應(yīng)答,不足以抵御毒物的破壞和侵襲。
【關(guān)鍵詞】：玉米赤霉烯酮 睪丸 精液品質(zhì) 血睪屏障
【學位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S859.87
【目錄】：

• 摘要10-11
• Abstract11-13
• 第一章 文獻綜述13-24
• 1.1 玉米赤霉烯酮生殖毒性的研究進展13-17
• 1.1.1 玉米赤霉烯酮的理化特性13
• 1.1.2 玉米赤霉烯酮的主要作用機制13-15
• 1.1.3 玉米赤霉烯酮的生殖毒性15-17
• 1.2 血睪屏障的研究進展17-23
• 1.2.1 血睪屏障的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)17-21
• 1.2.2 血睪屏障的功能21-23
• 1.3 本課題的研究目的和意義23-24
• 第二章 玉米赤霉烯酮對雄性小鼠生殖系統(tǒng)的急性攻毒作用24-44
• 2.1 材料與方法24-30
• 2.1.1 試驗動物24
• 2.1.2 主要試驗儀器24
• 2.1.3 主要藥品與試劑24-25
• 2.1.4 主要試劑的配制25
• 2.1.5 分組和給藥25
• 2.1.6 樣本采集和處理25
• 2.1.7 小鼠的生長狀況觀察25-26
• 2.1.8 睪丸與附睪的臟器指數(shù)檢測26
• 2.1.9 精液品質(zhì)的檢測26
• 2.1.10 血清睪酮和雌二醇的檢測26
• 2.1.11 睪丸標志酶的活力檢測26-27
• 2.1.12 睪丸組織總RNA的抽提27
• 2.1.13 睪丸組織RNA的檢測27-28
• 2.1.14 睪丸組織RNA的反轉(zhuǎn)錄28
• 2.1.15 設(shè)計合成引物28-29
• 2.1.16 熒光定量PCR檢測29-30
• 2.1.17 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析30
• 2.2 結(jié)果與分析30-40
• 2.2.1 小鼠生長狀態(tài)的觀察結(jié)果30-31
• 2.2.2 小鼠睪丸和附睪臟器系數(shù)的測定結(jié)果31
• 2.2.3 精液品質(zhì)的檢測結(jié)果31-32
• 2.2.4 血清睪酮和血清雌二醇的含量結(jié)果32-33
• 2.2.5 睪丸標志酶的檢測結(jié)果33-35
• 2.2.6 睪丸組織總RNA的電泳結(jié)果35
• 2.2.7 Vim、Cldn11、N-cad和β-actin基因擴增產(chǎn)物的測序與比對35-36
• 2.2.8 小鼠睪丸組織β-actin、Vim、Cldn11和N-cad基因qPCR引物的特異性和標準曲線36-39
• 2.2.9 小鼠睪丸組織中Vim、Cldn11和N-cad基因的相對表達量39-40
• 2.3 討論40-43
• 2.3.1 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠生長狀況的影響40-41
• 2.3.2 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠血清激素水平的影響41
• 2.3.3 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠精液品質(zhì)的影響41-42
• 2.3.4 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠睪丸標志酶的影響42
• 2.3.5 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠Vim、Cldn11和N-cad基因相對表達量的影響42-43
• 2.4 小結(jié)43-44
• 第三章 玉米赤霉烯酮對雄性小鼠生殖系統(tǒng)的慢性攻毒作用44-63
• 3.1 材料與方法44-49
• 3.1.1 試驗動物44
• 3.1.2 主要試驗儀器44
• 3.1.3 主要藥品與試劑44
• 3.1.4 主要試劑的配制44-45
• 3.1.5 分組和給藥45
• 3.1.6 樣本采集和處理45
• 3.1.7 小鼠的生長狀況觀察45-46
• 3.1.8 睪丸與附睪的臟器指數(shù)檢測46
• 3.1.9 精液品質(zhì)的檢測46
• 3.1.10 血清睪酮和雌二醇的檢測46
• 3.1.11 血清肝功能和腎功能檢測46
• 3.1.12 睪丸標志酶的活力檢測46-47
• 3.1.13 睪丸組織病理學檢查47-48
• 3.1.14 睪丸組織總RNA的抽提48
• 3.1.15 睪丸組織RNA的檢測48
• 3.1.16 睪丸組織RNA的反轉(zhuǎn)錄48
• 3.1.17 設(shè)計合成引物48
• 3.1.18 熒光定量PCR檢測48
• 3.1.19 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析48-49
• 3.2 結(jié)果與分析49-58
• 3.2.1 小鼠生長狀態(tài)的觀察結(jié)果49
• 3.2.2 小鼠睪丸和附睪臟器系數(shù)的測定結(jié)果49-50
• 3.2.3 精液品質(zhì)的檢測結(jié)果50
• 3.2.4 血清睪酮和雌二醇的含量結(jié)果50-51
• 3.2.5 小鼠肝腎功能的檢測結(jié)果51-52
• 3.2.6 睪丸標志酶的檢測結(jié)果52-53
• 3.2.7 小鼠睪丸組織的病理學觀察結(jié)果53-54
• 3.2.8 睪丸組織總RNA的電泳結(jié)果54
• 3.2.9 Vim、Cldn11、N-cad、StAR、Cyplla1和β-actin基因擴增產(chǎn)物的測序與比對54-55
• 3.2.10 小鼠睪丸組織β-actin、Vim、Cldn11、N-cad、StAR和Cyplla1基因qPCR引物的特異性和標準曲線55-57
• 3.2.11 小鼠睪丸組織中Vim、Cldn11、N-cad、StAR和Cyplla1基因的相對表達量57-58
• 3.3 討論58-61
• 3.3.1 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠生長狀況的影響58-59
• 3.3.2 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠血清激素水平的影響59
• 3.3.3 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠精液品質(zhì)的影響59
• 3.3.4 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠肝腎功能的影響59-60
• 3.3.5 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠睪丸標志酶的影響60
• 3.3.6 不同水平玉米赤霉烯酮對雄性小鼠Vim、Cldn11、N-cad、StAR和Cyplla1基因相對表達量的影響60-61
• 3.4 小結(jié)61-63
• 結(jié)論63-64
• 參考文獻64-70
• 英文縮寫詞表70-71
• 致謝71-72
• 攻讀學位期間發(fā)表文章72

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