C型凝集素受體MR和Dectin-2在樹(shù)突狀細(xì)胞參與旋毛蟲(chóng)感染免疫中的作用研究
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【摘要】:旋毛蟲(chóng)病作為世界性分布的一種人獸共患病,嚴(yán)重危害人體健康,同時(shí)對(duì)畜牧業(yè)也造成極大地經(jīng)濟(jì)損失。寄生線(xiàn)蟲(chóng)由于生活史及其蟲(chóng)體結(jié)構(gòu)的復(fù)雜,導(dǎo)致其免疫機(jī)制尚未弄清,這對(duì)線(xiàn)蟲(chóng)病的預(yù)防及治療帶來(lái)了困擾。寄生蟲(chóng)免疫逃避機(jī)制一直以來(lái)都是寄生蟲(chóng)學(xué)研究的難點(diǎn)。為探究MR和Dectin-2在旋毛蟲(chóng)感染過(guò)程中的作用,本研究通過(guò)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在旋毛蟲(chóng)感染過(guò)程中,小鼠體內(nèi)樹(shù)突狀細(xì)胞表面MR和Dectin-2受體的表達(dá)量變化,進(jìn)一步利用受體抑制劑抑制MR和Dectin-2,檢測(cè)經(jīng)抑制處理的樹(shù)突狀細(xì)胞致敏旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)ES抗原后的成熟情況,驗(yàn)證兩種受體在旋毛蟲(chóng)感染過(guò)程中的作用,為旋毛蟲(chóng)的相關(guān)研究提供支持。具體研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:(1)旋毛蟲(chóng)感染對(duì)DC表面MR和Dectin-2受體表達(dá)的影響:84只雌性BABL/c小鼠平均分成兩組,實(shí)驗(yàn)組每鼠灌服300條旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng),分別于感染后第7、14、21、28、35、42天取每組小鼠6只,分離脾臟和腸系膜淋巴結(jié)(MLN),制備單細(xì)胞懸液,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟和MLN內(nèi)DC上Dectin-2的表達(dá)情況;對(duì)照組不感染旋毛蟲(chóng)。流式結(jié)果表明,在感染后第7天,脾臟內(nèi)樹(shù)突狀細(xì)胞表面的MR和Dectin-2均出現(xiàn)明顯下降(P㩳0.05),此后脾臟內(nèi)兩種受體均無(wú)明顯變化,腸系膜淋巴結(jié)內(nèi)MR出現(xiàn)下降,Dectin-2出現(xiàn)升高(P㩳0.05);在感染后第14、21、35天,MLN內(nèi)DC表面MR出現(xiàn)升高(P㩳0.05);感染后第21、28天MLN內(nèi)DC表面Dectin-2受體出現(xiàn)升高。(2)旋毛蟲(chóng)ES抗原對(duì)BMDC表面MR和Dectin-2的表達(dá)的影響:制備旋毛蟲(chóng)ES抗原,體外培養(yǎng)BMDC,將ES抗原致敏BMDC后第6、12、24、36、48h流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MR和Dectin-2的表達(dá)量。流式結(jié)果表明,應(yīng)用旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)抗原刺激BMDC我們發(fā)現(xiàn)在致敏抗原后第6-36h,MR和Dectin-2均出現(xiàn)降低,在48h恢復(fù)正常水平。(3)ES抗原作用下MR和DECTIN-2對(duì)BMDC成熟影響研究:將培養(yǎng)的樹(shù)突狀細(xì)胞分為陰性對(duì)照組(DC)、陽(yáng)性對(duì)照組(DC+ES抗原)、MR抑制對(duì)照組(DC+MR抑制劑)、雙抑制對(duì)照組(DC+雙抑制劑)、MR抑制實(shí)驗(yàn)組(DC+MR抑制劑+ES抗原)和雙抑制實(shí)驗(yàn)組(DC+雙抑制劑+ES抗原)共六組、每組設(shè)5個(gè)副孔。加入相應(yīng)抑制劑后再加入ES抗原,作用15分鐘后更換DC普通培養(yǎng)基,48h后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DC表面CD80和CD86表達(dá)量。流式結(jié)果表明,抑制MR后,負(fù)載旋毛蟲(chóng)ES抗原的DC的CD80和CD86有所升高(P㩳0.05),這說(shuō)明旋毛蟲(chóng)可以利用MR抑制DC的成熟;同時(shí)抑制MR和Dectin-2后,負(fù)載旋毛蟲(chóng)ES抗原的DC成熟情況與未抑制組相同。本研究表明旋毛蟲(chóng)可以利用ES抗原,通過(guò)MR抑制樹(shù)突狀細(xì)胞的識(shí)別;同時(shí)抑制MR和Dectin-2后,負(fù)載旋毛蟲(chóng)ES抗原的DC成熟情況與未抑制組相同,這將有助于豐富旋毛蟲(chóng)感染相關(guān)基礎(chǔ)理論,為旋毛蟲(chóng)免疫逃避機(jī)制的研究提供參考。
【關(guān)鍵詞】:旋毛蟲(chóng) 樹(shù)突狀細(xì)胞 抗原識(shí)別 甘露糖受體 Dectin-2
【學(xué)位授予單位】:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類(lèi)號(hào)】:S855.9
【目錄】:
- 摘要4-6
- ABSTRACT6-10
- 前言10-11
- 第一篇 文獻(xiàn)綜述11-19
- 第一章 C型凝集素受體在寄生蟲(chóng)感染免疫調(diào)節(jié)中的作用11-16
- 1.1 C型凝集素受體的結(jié)構(gòu)11
- 1.2 C型凝集素受體的分類(lèi)11-12
- 1.3 C型凝集素受體在寄生蟲(chóng)感染中的作用12-16
- 第二章 樹(shù)突狀細(xì)胞與寄生蟲(chóng)感染16-19
- 2.1 樹(shù)突狀細(xì)胞16-17
- 2.2 樹(shù)突狀細(xì)胞與寄生蟲(chóng)感染17-18
- 2.3 展望18-19
- 第二篇 研究?jī)?nèi)容19-54
- 第一章 旋毛蟲(chóng)感染對(duì)DC表面MR和DECTIN-2 受體表達(dá)的影響19-37
- 1.1 材料與方法19-23
- 1.2 結(jié)果23-34
- 1.3 討論34-36
- 1.4 小結(jié)36-37
- 第二章 ES抗原對(duì)BMDC表面MR和DECTIN-2 受體表達(dá)的影響37-48
- 2.1.材料與方法37-41
- 2.2 結(jié)果41-46
- 2.3 討論46
- 2.4 小結(jié)46-48
- 第三章 ES抗原作用下MR和DECTIN-2 對(duì)BMDC成熟影響研究48-54
- 3.1 材料和方法48-50
- 3.2 結(jié)果50-52
- 3.3 討論52-53
- 3.4 小結(jié)53-54
- 結(jié)論54-55
- 參考文獻(xiàn)55-61
- 附錄61-62
- 作者簡(jiǎn)介62-64
- 致謝64
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本文編號(hào):438096
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