旨在了解胰島素降解酶(insulin-degrading enzyme,Ide)在豬不同組織中的表達情況,及其在C2C12成肌細胞增殖和分化中的作用。本研究利用RT-PCR和Western blotting技術檢測了Ide在8月齡雄性小型豬不同組織中的表達;利用siRNA技術干擾Ide表達,檢測了Ide在C2C12成肌細胞增殖、凋亡和分化中的作用,試驗分為Ide-siRNA處理組和NC-siRNA(negative control)對照組,每組3個重復。結果顯示,Ide在豬的不同組織(包括大腦、股四頭肌、股二頭肌、背最長肌、心、肝、脾、肺、腎和睪丸)中廣泛表達,其中,在股四頭肌、腎和睪丸中表達量相對更高。Ide-siRNA轉染成肌細胞48 h后,Ide表達量極顯著下降(P<0.001)。CCK-8檢測顯示,干擾Ide表達促進了成肌細胞的增殖,細胞周期相關基因表達也顯著升高,同時發(fā)現(xiàn)干擾Ide表達未引起成肌細胞凋亡。利用2%馬血清誘導成肌細胞分化的同時轉染Ide-siRNA以干擾其表達,在分化的第2和5天發(fā)現(xiàn),與對照組相比,分化相關基因Myog、Myhc等在干擾組中的表達均顯著下降...

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【部分圖文】：

圖1 Ide在小型豬不同組織中的表達

對小型豬大腦、股四頭肌、股二頭肌、背最長肌、心、肝、脾、肺、腎和睪丸10個組織中IdemRNA和蛋白表達情況進行檢測,結果發(fā)現(xiàn),IdemRNA在小型豬不同組織中均有表達(圖1A),Westernblotting結果(圖1B)顯示,IDE蛋白在股四頭肌、腎和睪丸中表達量高于其....

圖2 Ide-siRNAs干擾效率檢測

成肌細胞中轉染Ide-si-1和NC-siRNA48h后檢測成肌細胞相關基因Myod、Myog的表達變化,結果如圖3所示,RT-qPCR檢測mRNA相對表達量發(fā)現(xiàn),降低Ide表達后(P<0.001),成肌細胞相關基因Myod(P<0.01)和Myog(P<0.05)的表達顯著....

圖3 干擾Ide 48h后成肌細胞相關基因表達

圖2Ide-siRNAs干擾效率檢測2.4干擾Ide表達促進成肌細胞增殖

圖4 干擾Ide對成肌細胞增殖的影響

為了解Ide在成肌細胞分化中的作用,使用2%馬血清誘導細胞成肌分化的同時轉染Ide-si-1和NC-siRNA,計為第0天,在第3天再次轉染,收集第2(D2)和5天(D5)細胞,檢測分化相關基因的表達。RT-qPCR結果顯示,與對照組相比,Ide干擾組在分化第2天,隨著Ide表達....

本文編號：4047116