口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)是引起豬、牛、羊等偶蹄動物口蹄疫的重要病原,有七個血清型。全球范圍內FMDV O型的流行狀況最為復雜,我國近年來就先后有3個拓撲型中的4個譜系的病毒株傳入并造成流行,是目前防控難度最大的病毒血清型。FMDV O型不同譜系病毒的抗原結構存在明顯差異,表現(xiàn)為抗原匹配性與交叉免疫保護效果的不同;抗原結構變異分析是口蹄疫防控產品研制需要重點關注的問題。單個B細胞抗體技術是目前篩選識別不同位點中和抗體的最新方法,為研究抗原結構變異提供了豐富的抗體工具。本研究首先用FMDV O型3個譜系的毒株免疫牛,然后采集抗凝血分離牛外周血單個核細胞(PBMCs)。利用生物素標記的FMDV O型146S顆粒作為誘餌抗原,通過流式細胞術從免疫牛PBMCs中分選抗原特異性單個B細胞;通過單細胞PCR技術從單個B細胞中擴增牛IgG抗體重鏈與輕鏈可變區(qū)(VH與VL)基因序列,將可變區(qū)基因插入含有牛IgG抗體恒定區(qū)的pcDNA3.4載體中,構建完整IgG抗體的表達質粒。將表達質粒轉染中國倉鼠卵巢懸浮細胞(CHO-S)進行抗體表達與純化。通過酶聯(lián)...

【文章頁數】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1血清中FMDV特異性抗體效價的檢測Figure2.1ThedetectionoftheFMDV-specificantibodytitersinsera

圖2.1血清中FMDV特異性抗體效價的檢測Figure2.1ThedetectionoftheFMDV-specificantibodytitersinse血清中FMDVO型特異性抗體的效價，我們采用液相LISA檢測FMDVO型特異性抗體....

圖3.1生物素標記抗原WB檢測結果

3.1生物素標記抗原WB檢測結量標準；1：生物素標記抗原；.1Analysisofbiotin-labeledantigeightmarker;1:Biotin-labeledantig及表型特征，F(xiàn)MDV特異性B細胞在感Cs，以分析FMDV特異性....

圖3.2流式分選抗原特異性B細胞結果

20圖3.2流式分選抗原特異性B細胞結果MDV特異性B細胞的分布；B：FMDV特異性B細胞在IgM+B細胞中的分布和比例；C：FMDV細胞在IgM-B細胞中的分布和比例Figure3.2Resultsofthesortedantigen-s....

圖3.3IgG抗體可變區(qū)基因PCR擴增結果

圖3.3IgG抗體可變區(qū)基因PCR擴增結果M：250bp-IDNA分子質量標準Figure3.3PCRamplificationofIgGvariableregiongenesM:250bp-IDNAmarkerPCR擴增出IgG抗體重....

本文編號：4032971