旨在從寧夏某奶牛群持續(xù)感染牛分離牛源牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）,并解析其基因組特征,為研究我國不同地區(qū)BVDV分離株遺傳演化規(guī)律提供理論依據(jù)。利用BVDV抗原檢測試劑盒檢測寧夏回族自治區(qū)銀川市某示范區(qū)的240頭高產奶牛間隔兩周的雙份抗凝血,篩選持續(xù)感染牛,分離血液淋巴細胞制備裂解液接種牛腎細胞（MDBK）,分離鑒定獲得BVDV株,克隆測序獲得全基因組序列,比較分析其遺傳演化關系。從該示范區(qū)高產奶牛篩選獲得2頭持續(xù)感染牛,分離獲得1株非致細胞病變型BVDV,命名為NX2019/01。測序獲得基因組全序列（12 107 nt）,其中ORF長11 703 nt,編碼3 898個氨基酸。在基因組水平,NX2019/01株與我國SD-15、ZM-95、XC、LN-1等1m亞型分離株相似性較高（92.17%～93.84%）,但E^rns、E1以及E2基因存在較大差異。示范區(qū)同群牛急性感染BVDV時,毒株E2蛋白N端編碼區(qū)核苷酸突變可導致第9位或第67位氨基酸變異。重組分析表明,NX2019/01株E2基因179—288位核苷酸區(qū)段以及ZM-95株E1基因168位—E2基因33...

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圖1 牛EDTA抗凝血BVDV抗原檢測結果

利用抗原檢測試劑盒檢測抗凝血中的BVDV抗原,結果如圖1所示,從240份樣品共檢出4份為BVD抗原陽性,復檢判定兩頭犢牛(No.221、No.389)為BVDV持續(xù)感染牛。2.2RT-PCR檢測

圖2 BVDV基因片段RT-PCR擴增結果

利用初檢病毒抗原陽性(4份)和復檢陽性(2份)的抗凝血提取總RNA,分別利用5′UTR通用引物和E2蛋白N端編碼區(qū)引物進行RT-PCR檢測,結果均擴增獲得預期目的條帶(圖2)。測序所得BVDV5′UTR核苷酸只有1～2個堿基的差異,一致性為98.9%～100%,與GenBank....

圖3 免疫熒光法鑒定NX2019/01分離株(200×)

利用病毒抗原含量較高的復檢陽性牛(No.389)抗凝血制備淋巴細胞裂解液,接種MDBK細胞盲傳至第6代仍未出現(xiàn)細胞病變,但第6代細胞裂解液接種MDBK細胞48h利用免疫熒光鑒定可觀察到綠色熒光(圖3),說明成功獲得NCP型BVDV分離株,命名為NX2019/01。2.4病毒....

圖4 RT-PCR擴增NX2019/01分離株基因組

NX2019/01株基因組長12107bp(5′UTR和3′UTR部分測定),其ORF長11703nt,編碼3898個氨基酸。毒株編碼區(qū)組成包括N基因(504nt)、C基因(312nt)、Erns基因(681nt)、E1基因(585nt)、E2基因(1122....

本文編號：4028814