【目的】通過高通量測序的方法獲得PCV2感染3D4/21細胞的miRNAs表達譜,并探討miRNA-98在PCV2復(fù)制中的作用�！痉椒ā勘狙芯恳载i肺泡巨噬細胞系3D4/21細胞為細胞模型,對PCV2感染過程中的3D4/21細胞進行miRNAs差異表達分析,篩選與病毒復(fù)制相關(guān)的特異性miRNAs,并探討其在PCV2復(fù)制中的作用。【結(jié)果】經(jīng)高通量測序,獲得PCV2感染3D4/21細胞的miRNAs表達譜,結(jié)合實驗室前期研究篩選獲得miRNA-98。實驗表明,miRNA-98的表達量隨PCV2感染時間的延長而持續(xù)升高,其變化趨勢與Cap蛋白表達變化基本一致,由此推測miRNA-98與PCV2復(fù)制正相關(guān)。過表達miRNA-98可顯著上調(diào)Cap蛋白的表達量和PCV2的復(fù)制。進一步的研究表明,miRNA-98參與調(diào)節(jié)宿主免疫相關(guān)細胞因子的表達和PCV2的復(fù)制。【結(jié)論】miRNA-98可通過調(diào)節(jié)免疫相關(guān)細胞因子的表達調(diào)控宿主免疫功能,幫助PCV2逃逸宿主免疫,促進PCV2在3D4/21細胞中的復(fù)制。這些發(fā)現(xiàn)不僅為深入了解PCV2與宿主之間的關(guān)系提供了新視角,還有望為豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病的防控提供新的抗...

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【部分圖文】：

圖1.PCV2感染3D4/21細胞miRNAs的表達

為了鑒定PCV2感染3D4/21細胞中miRNA-98表達豐度的變化，初步探索其變化與PCV2感染之間的關(guān)系，本研究利用Westernblotting和實時熒光定量PCR分別檢測PCV2Cap蛋白和miRNA-98在PCV2感染3D4/21細胞后不同時間點的表達量。由圖2-A....

圖2.PCV2感染3D4/21細胞后不同時間點PCV2 ORF2和miRNA-98的表達

圖1.PCV2感染3D4/21細胞miRNAs的表達2.3miRNA-98對PCV2復(fù)制的影響

圖3.miRNA-98對PCV2復(fù)制的作用

Westernblotting檢測結(jié)果顯示(圖3-D),mimiccontrol組、inhibitorcontrol組和2010AHCY組幾乎無差異，這也表明轉(zhuǎn)染并未對PCV2的感染產(chǎn)生影響。miRNA-98mimic轉(zhuǎn)染后過表達miRNA-98增強了Cap蛋白的表達，相....

圖4.miRNA-98對PCV2感染3D4/21過程中細胞因子表達的影響

為了探討miRNA-98是否參與調(diào)節(jié)宿主免疫相關(guān)細胞因子的表達，本文將3D4/21細胞分別轉(zhuǎn)染miRNA-98mimic及mimiccontrol，隨后，感染PCV22010AHCY株(MOI=1)。感染后36h，應(yīng)用qRT-PCR檢測與細胞凋亡、炎癥、細胞周期和抗病毒功....

本文編號：4014821