通過體細胞核移植技術,卵母細胞的重編程因子可將高度分化的體細胞重編程,形成重構克隆胚胎,并能發(fā)育成完整的動物個體。卵母細胞的質(zhì)量和重編程能力是體細胞克隆技術最關鍵的限制因素之一。在體內(nèi)正常發(fā)育過程中卵母細胞處于低氧環(huán)境,且卵泡液含有自由基清除劑和抗氧化酶,可保護卵母細胞免受氧化損傷。與體內(nèi)成熟的卵母細胞相比,體外成熟(IVM)卵母細胞處于一個相對高氧的環(huán)境,并且缺乏自由基清除劑和抗氧化酶的保護,因而其活性氧水平較高,從而表現(xiàn)出較低的質(zhì)量和發(fā)育潛力�；钚匝醯倪^量產(chǎn)生會引起氧化應激,破壞細胞膜并誘導細胞凋亡。褪黑素作為有效的自由基清除劑和廣譜抗氧化劑,可直接清除活性氧并減少細胞氧化損傷。最近的研究表明,褪黑素存在于卵泡液中,同時在體外培養(yǎng)過程中補充褪黑素可提高卵母細胞的受精能力和發(fā)育能力,在早期胚胎發(fā)育期間補充褪黑素可顯著改善SCNT胚胎的發(fā)育能力。然而,關于褪黑素如何改善卵母細胞質(zhì)量和發(fā)育潛力的潛在機制需要進一步研究。另外,IVM期間添加褪黑素對后續(xù)胚胎發(fā)育的影響仍不清楚。因此,在這項研究中,我們通過在IVM培養(yǎng)基中補充褪黑素,探究其對體外牛卵母細胞質(zhì)量和后續(xù)胚胎發(fā)育能力的影響機制。以下...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號對照表
綜述部分
    第一章 卵母細胞與體細胞核移植胚胎
        1.1 體細胞核移植技術
        1.2 卵母細胞在克隆胚胎早期發(fā)育過程中的重要作用
            1.2.1 提供能量的線粒體
            1.2.2 介導減數(shù)分裂的紡錘體
            1.2.3 母源組蛋白及其變體
        1.3 表觀遺傳修飾在克隆胚胎早期發(fā)育過程中的作用
            1.3.1 組蛋白乙酰化
            1.3.2 組蛋白甲基化
            1.3.3 DNA甲基化
    第二章 褪黑素的功能與作用
        2.1 褪黑素的發(fā)現(xiàn)與生理功能
        2.2 褪黑素在生殖過程中的作用
試驗部分
    第三章 褪黑素對卵母細胞體外成熟質(zhì)量及其后續(xù)胚胎發(fā)育的影響
        3.1 材料和試劑
            3.1.1 材料來源
            3.1.2 儀器設備
            3.1.3 主要溶液及試劑耗材
        3.2 方法
            3.2.1 卵母細胞的體外成熟
            3.2.2 卵母細胞的免疫熒光染色
            3.2.3 卵母細胞 ROS 水平的測定
            3.2.4 卵母細胞早期凋亡的檢測
            3.2.5 卵母細胞線粒體活性的檢測
            3.2.6 體細胞核移植
            3.2.7 體外受精
            3.2.8 囊胚的免疫熒光染色
            3.2.9 囊胚細胞的差異染色
            3.2.10 囊胚細胞的凋亡檢測
            3.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        3.3 結果
            3.3.1 褪黑素對卵母細胞成熟率的影響
            3.3.2 褪黑素對牛卵母細胞 ROS 水平和早期凋亡水平的影響
            3.3.3 褪黑素對牛卵母細胞線粒體活性的影響
            3.3.4 褪黑素對牛卵母細胞紡錘體形態(tài)的影響
            3.3.5 褪黑素牛卵母細胞表觀遺傳修飾的影響
            3.3.6 牛卵母細胞體外成熟過程中添加褪黑素對后續(xù)胚胎發(fā)育的影響
            3.3.7 牛卵母細胞體外成熟過程中添加褪黑素對后續(xù)胚胎質(zhì)量的影響
            3.3.8 牛卵母細胞體外成熟過程中添加褪黑素對后續(xù)胚胎表觀修飾的影響
        3.4 討論
        3.5 小結
    第四章 褪黑素對體外成熟卵母細胞基因表達的影響
        4.1 材料和試劑
            4.1.1 材料來源
            4.1.2 儀器設備
            4.1.3 主要溶液及試劑耗材
        4.2 方法
            4.2.1 樣品收集
            4.2.2 轉錄組測序
            4.2.3 轉錄組測序數(shù)據(jù)過濾與質(zhì)控
            4.2.4 轉錄組測序數(shù)據(jù)比對分析
            4.2.5 樣品間數(shù)據(jù)相關性分析
            4.2.6 差異表達基因篩選與分析
            4.2.7 差異表達基因深入挖掘
            4.2.8 實時熒光定量PCR
        4.3 結果
            4.3.1 轉錄組測序樣品的數(shù)據(jù)過濾與質(zhì)量評估
            4.3.2 轉錄組測序數(shù)據(jù)的比對情況
            4.3.3 基于基因表達水平的樣品間相關性分析
            4.3.4 差異表達基因篩選結果
            4.3.5 組間差異基因的基因本體功能顯著性富集分析
            4.3.6 組間差異基因的Pathway顯著性富集分析
            4.3.7 差異表達基因qPCR驗證結果
        4.4 討論
        4.5 小結
全文結論
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：3991192