埃博拉出血熱(Ebola haemorrhagic fever,EHF)是埃博拉病毒(Ebola Virus,EBOV)感染人體后導(dǎo)致發(fā)熱和急性出血等癥狀的一種人獸共患烈性傳染病。該病于1976年首次被報(bào)道,以2014年在西非爆發(fā)的EHF疫情最為嚴(yán)重,此次疫情導(dǎo)致超過(guò)28000人感染,11000人死亡,其危害性對(duì)人類公共衛(wèi)生安全構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。我國(guó)雖未爆發(fā)該病,但仍需要研制出安全有效的疫苗來(lái)預(yù)防EHF。目前已報(bào)道埃博拉病毒具有6個(gè)亞型,扎伊爾型和蘇丹型是造成人類感染的最主要病因,本迪布焦型和科特迪瓦型在人類中呈偶發(fā)感染,萊斯頓型和邦巴利型對(duì)人類沒有致病性。新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是副粘病毒科(Paramyxoviridae)的單股負(fù)鏈RNA病毒,其基因組編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白(NP、M、P、F、L、HN)和2種非結(jié)構(gòu)蛋白(W、V)。NDV作為活病毒疫苗載體具有較高的安全性和遺傳穩(wěn)定性,可以同時(shí)誘發(fā)動(dòng)物機(jī)體多種免疫反應(yīng),因此被廣泛應(yīng)用于針對(duì)各種人類疾病的重組疫苗的研制。我們之前的研究表明,以NDV為載體構(gòu)建表達(dá)EBOV GP的重組病毒rLa-EBOV...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
碩士學(xué)位論文評(píng)閱人、答辯委員會(huì)簽名表
摘要
abstract
主要符號(hào)對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 埃博拉出血熱及其疫苗現(xiàn)狀
        1.1.1 埃博拉出血熱流行特點(diǎn)及流行現(xiàn)狀
        1.1.2 埃博拉出血熱的發(fā)病機(jī)理及特征
        1.1.3 埃博拉病毒引發(fā)組織損傷的機(jī)制
        1.1.4 埃博拉出血熱診治與防控措施
        1.1.5 埃博拉出血熱疫苗的研究現(xiàn)狀
    1.2 埃博拉病毒的分子生物學(xué)特征
        1.2.1 EBOV的形態(tài)特征及基因組結(jié)構(gòu)
        1.2.2 EBOV的基因組結(jié)構(gòu)及蛋白功能
        1.2.3 GP蛋白的結(jié)構(gòu)和功能
    1.3 新城疫病毒
        1.3.1 新城疫病毒粒子結(jié)構(gòu)及基因組組成
        1.3.2 新城疫病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)成
        1.3.3 NDV作為疫苗載體的特點(diǎn)
        1.3.4 NDV作為疫苗載體的應(yīng)用
        1.3.5 NDV作為疫苗載體的發(fā)展前景
    1.4 研究目的及意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒株和細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 血清、雞胚和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 裂解位點(diǎn)突變型ZEBOV GP(I532R)克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.2 攜帶ZEBOV GP(I532R)的NDV全長(zhǎng)重組基因組c DNA的構(gòu)建
        2.2.3 重組病毒r La-EBOVGP(I532R)的拯救
        2.2.4 重組病毒r La-EBOVGP(I532R)的RT-PCR鑒定
        2.2.5 EBOVGP(I532R)的表達(dá)鑒定
            2.2.5.1 Western blot檢測(cè)
            2.2.5.2 間接免疫熒光鑒定
        2.2.6 免疫電鏡觀察重組病毒粒子的形態(tài)特征
        2.2.7 重組病毒的體外感染試驗(yàn)
        2.2.8 重組病毒的致病性分析
        2.2.9 重組病毒的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特征分析
            2.2.9.1 雞胚半數(shù)感染量(EID50)的測(cè)定
            2.2.9.2 組織細(xì)胞半數(shù)感染量(TCID50)的測(cè)定
        2.2.10 重組病毒對(duì)小鼠的安全性試驗(yàn)
        2.2.11 小鼠的免疫試驗(yàn)
            2.2.11.1 ELISA檢測(cè)特異性抗體水平
            2.2.11.2 中和抗體的免疫效力檢測(cè)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 裂解位點(diǎn)突變型ZEBOV GP(I532R)基因序列的鑒定及分析
    3.2 攜帶ZEBOV GP(I532R)的NDV全長(zhǎng)重組基因組c DNA的構(gòu)建及病毒拯救
    3.3 重組病毒的RT-PCR鑒定
    3.4 ZEBOV GP(I532R)的表達(dá)鑒定
        3.4.1 Western blot檢測(cè)
        3.4.2 IFA檢測(cè)ZEBOV GP(I532R)在細(xì)胞中的表達(dá)
    3.5 免疫電鏡觀察重組病毒粒子的形態(tài)特征
    3.6 r La-EBOVGP(I532R)在體外的感染性分析
    3.7 r La-EBOVGP(I532R)的致病性分析
    3.8 重組病毒生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特征分析
        3.8.1 r La-EBOVGP(I532R)的雞胚生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特征分析
        3.8.2 r La-EBOVGP(I532R)的體外生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特征分析
    3.9 r La-EBOVGP(I532R)在小鼠中安全性試驗(yàn)
    3.10 小鼠的免疫試驗(yàn)
        3.10.1 小鼠血清中特異性IgG水平及亞型的測(cè)定
        3.10.2 小鼠的中和抗體水平分析
第四章 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 A
附錄 B
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3986229