雞球蟲病是一種由艾美耳屬的球蟲寄生在雞腸道引起的原蟲病,該病呈世界性分布、感染率高、危害性大。其中尤其以柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria tenella)致病力最強、造成的損失最為嚴(yán)重。目前雞球蟲病的防治主要依靠藥物和少數(shù)幾種活苗,但藥物防治存在的耐藥性和藥物殘留問題以及活苗存在的毒力返強、散毒等風(fēng)險使得業(yè)內(nèi)迫切需要研制一種新型的雞球蟲疫苗。本研究以柔嫩艾美耳球蟲子孢子表面蛋白TA4基因為抗原分子,以甲病毒復(fù)制子載體pSMART2b為真核表達載體,串聯(lián)雞細胞因子IL-2作為佐劑,構(gòu)建了重組質(zhì)粒pSMART2b-TA4-IL-2,確定重組質(zhì)粒p SMART2b-TA4-IL-2誘導(dǎo)雞的免疫應(yīng)答和抗柔嫩艾美耳球蟲保護效果,最后對該疫苗進行了安全性評價。重組質(zhì)粒pSMART2b-TA4-IL-2的構(gòu)建、表達和鑒定首先PCR擴增EtTA4和雞IL-2基因,然后融合PCR擴增TA4-IL-2基因并連接至pMD18-T克隆載體,最后將TA4-IL-2基因連接至pSMART2b載體。重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、雙酶切和測序鑒定正確后將重組質(zhì)粒pSMART2b-TA4-IL-2轉(zhuǎn)染至293T細胞后經(jīng)Western...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1PCR擴增TA4基因

第二篇研究容第一章重組質(zhì)粒pSMART2b-TA4-IL-2的構(gòu)建、表和鑒定4℃過夜。TBST洗膜3次，每次15min。（6）二抗孵育：按照1:2000加HRP標(biāo)記的山羊抗雞IgG，室溫搖床孵育50min。TBST洗膜5次，每次15min。....

圖1.2PCR擴增IL-2基因Fig.1.1AmplificationoftheTA4genebyPCRFig.1.2AmplificationoftheIL-2genebyPCR

第二篇研究容第一章重組質(zhì)粒pSMART2b-TA4-IL-2的構(gòu)建、表和鑒定4℃過夜。TBST洗膜3次，每次15min。（6）二抗孵育：按照1:2000加HRP標(biāo)記的山羊抗雞IgG，室溫搖床孵育50min。TBST洗膜5次，每次15min。....

圖1.3融合PCR擴增TA4-IL-2基因Fig.1.3AmplificationoftheTA4-IL-2genebyfusionPCR

1.3融合PCR擴增TA4-IL-2基因lificationoftheTA4-IL-2genebyfuIL-2、pMD18-T-TA4-IL-2和pMD1BamHI和ClaI對重組質(zhì)D18-T-TA4進行雙酶切，結(jié)果分別條帶，結(jié)果見圖....

圖1.4重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定結(jié)果

1.3融合PCR擴增TA4-IL-2基plificationoftheTA4-IL-2genebyT-IL-2、pMD18-T-TA4-IL-2和pM酶BamHI和ClaI對重組pMD18-T-TA4進行雙酶切，結(jié)果分的條帶，結(jié)果見圖1....

本文編號：3981733