本研究旨在利用雞肝癌(LMH)細(xì)胞從FAdV感染雞的肝臟中進(jìn)行病毒分離,利用PCR擴(kuò)增與序列測(cè)定、TCID₅₀測(cè)定以及雞胚接種等方法對(duì)分離獲得的1株3型禽腺病毒進(jìn)行鑒定與分析。結(jié)果顯示:LMH細(xì)胞接毒96 h左右會(huì)出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變,細(xì)胞體積變大,形態(tài)邊圓,折光度增強(qiáng),貼壁性減弱,呈半懸浮狀態(tài);將分離毒株在LMH細(xì)胞上連續(xù)傳代2～3次會(huì)穩(wěn)定出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變;接種LMH細(xì)胞進(jìn)行TCID₅₀測(cè)定,病毒滴度達(dá)到10^-7.67/0.1 mL;將分離株接種雞胚,96 h后死亡,胚體發(fā)紅萎縮,肝臟出血有壞死灶;PCR擴(kuò)增分離株的Hexon基因,并進(jìn)行其同源性和基因進(jìn)化樹(shù)分析顯示,分離株目的基因與參考毒株SR-49位于同一分支上,同源性在99.4%,同時(shí)將分離株命名為SX180203。本研究結(jié)果為禽腺病毒3型毒株疫苗的研發(fā)奠定了堅(jiān)實(shí)的物質(zhì)基礎(chǔ)。

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 細(xì)胞、菌株和載體
    1.2 臨床樣本
    1.3 病毒分離培養(yǎng)
    1.4 細(xì)胞培養(yǎng)物的PCR鑒定
    1.5 Hexon基因的擴(kuò)增和測(cè)序
    1.6 病毒細(xì)胞半數(shù)感染量測(cè)定
    1.7 雞胚致病性檢驗(yàn)及分析
2 結(jié)果
    2.1 臨床樣本剖檢
    2.2 病毒分離結(jié)果
    2.3 PCR鑒定結(jié)果
    2.4 Hexon基因同源性分析
    2.5 Hexon基因系統(tǒng)進(jìn)化分析
    2.6 病毒TCID50測(cè)定
    2.7 雞胚致病性檢驗(yàn)
3 討論



本文編號(hào)：3980323