豬流感(Swine influenza,SI)是由豬流感病毒(Swine influenza virus,SIV)引起的豬的一種呼吸道傳染病,其發(fā)病率可高達100%。豬流感常常繼發(fā)于豬繁殖與呼吸綜合征、支原體肺炎、圓環(huán)病等,之后會引起免疫損傷,進而延長呼吸道疾病的病程,提高死亡率。因此,在規(guī)模化養(yǎng)豬場中,豬流感普遍存在且難以根除,對生豬養(yǎng)殖產業(yè)具有重大威脅。A型流感是一種重要的人畜共患病,而豬又是禽、豬、人流感病毒共同的易感宿主,是流感病毒基因重組或重配的“混合器”以及產生流感病毒新流行毒株的“孵育器”,因此豬感染流感病毒后使病毒極易發(fā)生跨種傳播�；谪i流感在我國乃至世界范圍內對生豬健康高效養(yǎng)殖以及公共衛(wèi)生產生的重大威脅,預防和控制豬流感病毒的流行具有至關重要的意義。本研究利用已有的豬腎細胞CRISPR/Cas9全基因組敲除文庫(PK-15-GeCKO)篩選當前較為流行的歐亞禽系豬流感病毒復制必需的宿主基因。并在穩(wěn)定表達Cas9蛋白的PK-15細胞系(PK-15-Cas9)上單個敲低篩選到的某些基因的表達,初步驗證敲低該基因后抗流感病毒效果。同時為了更接近自然感染狀態(tài),選擇新生豬氣管上...

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【部分圖文】：

圖1-1A型流感病毒粒子結構示意圖(McHardyandAdams2009)

圖1-1A型流感病毒粒子結構示意圖(McHardyandAdams2009)Fig.1-1SchematicrepresentationofaninfluenzaAvirion(McHardyandAdams2009)1.1.2流感病毒基因組....

圖1-2A型流感病毒生命周期示意圖(TeVelthuisandFodor2016)

利用豬全基因組CRISPR/Cas9敲除文庫篩選豬流感病毒復制必需宿主基因在哺乳動物細胞中，PA的T552S突變提高了病毒聚合酶的復制能力，而在禽源細胞上沒有觀察到此突變導致的影響(Mehleetal.2012)。H1亞型病毒的HA中E190D/G225D....

圖1-3流感病毒與宿主因子互作網絡(Brassetal.2009)

圖1-3流感病毒與宿主因子互作網絡(Brassetal.2009)g.1-3Interactionnetworkbetweeninfluenzavirusandhostfactors(Brassetal.2009.5流感病毒相關宿主基因組學研....

圖1-4CRISPR-Cas9產生的DSBs和DNA修復的示意圖(JiangandDoudna2017)

華中農業(yè)大學2019屆碩士研究生學位論文內的gRNA序列，CRISPR/Cas9幾乎可以針對任意基因組序基因在靶位點產生雙鏈斷裂(double-strandbreak,DSB)(Jinek生激活DNA的自身修復機制：在提供供體時，激活的是無錯路，通過同源重組產生....

本文編號：3977848