為比較3種TLR配體對豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)病毒樣顆粒(VLP)疫苗的佐劑活性,本研究利用重組大腸桿菌表達腦膜炎奈瑟菌Ag473脂蛋白、創(chuàng)傷弧菌FlaB鞭毛蛋白和結核分枝桿菌熱應激蛋白70(Hsp70),采用鎳親和柱純化獲得該3種重組蛋白;分別將相同劑量(10μg)3種重組蛋白、ISA206佐劑(100μL)和不完全弗氏佐劑(FIA)(100μL)與PCV2 VLP疫苗(50μg)混合,肌肉注射免疫小鼠,初免后14 d加強免疫1次;初免后每周采血分離血清,采用ELISA檢測抗原特異抗體;加強免疫后14 d利用PCV2攻毒,攻毒后7 d和14 d采血分離血清,采用熒光定量PCR檢測病毒DNA拷貝數(shù);攻毒后14 d迫殺小鼠,制備并培養(yǎng)其脾細胞,經(jīng)PCV2 VLP疫苗刺激后,采用試劑盒檢測細胞因子的表達。SDS-PAGE分析結果顯示,3種TLR配體在重組大腸桿菌中均獲得正確表達,純化重組蛋白的純度大于90%。從初免14 d起,3個分子佐劑組中Ag473佐劑組的PCV2抗體水平最高,但低于ISA206佐劑組卻高于FIA組,差異不顯著(p>0.05)。在PCV2攻毒前,3個分子佐劑組中...

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【部分圖文】：

圖13種純化融合蛋白的SDS-PAGE分析

各重組菌經(jīng)IPTG誘導表達重組蛋白，SDS-PAGE分析顯示，pET-Hsp70/E.coli重組菌表達了31kuHis-Hsp70融合蛋白，表達產(chǎn)物為包涵體；pET-FlaB/E.coli重組菌表達了32kuHis-FlaB融合蛋白，表達產(chǎn)物為可溶性蛋白；pELK-Ag....

圖2免疫小鼠的Cap蛋白特異抗體檢測

采集小鼠首免后第7d、14d、21d、28d血清，ELISA檢測Cap蛋白特異抗體水平，結果顯示從首免后7d起，各免疫組小鼠均為PCV2Cap蛋白特異抗體檢測陽性（P/N≥2.1），抗體水平隨免疫時間延長呈明顯的上升趨勢，28d各組小鼠抗體水平達到最高值；其中Ag4....

圖4免疫小鼠脾細胞的IFN-γ表達檢測

圖3免疫小鼠脾細胞的TNF-α表達檢測圖5免疫小鼠脾細胞的IL-4表達檢測

圖3免疫小鼠脾細胞的TNF-α表達檢測

免疫小鼠脾細胞經(jīng)ConA或ELP-VLP刺激后72h，利用ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清中各細胞因子濃度。結果顯示，與未免疫對照組相比，5個免疫組的TNF-α、IFN-γ表達水平顯著升高（p<0.05），且ELP-VLP刺激組高于ConA刺激組。在3種分子佐劑中，Ag473佐劑組的....

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