發(fā)布時(shí)間：2024-04-14 20:20

　　目的：本論文旨在研究豬紅細(xì)胞遞呈免疫復(fù)合物的功能,以期為課題組進(jìn)一步開展動(dòng)物紅細(xì)胞免疫系統(tǒng)及其分子機(jī)制的相關(guān)研究提供理論數(shù)據(jù)。方法：以長白豬為研究對象,常規(guī)分離豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)及紅細(xì)胞,以熒光大腸桿菌(FITC-WT E.coli)為報(bào)告因子,構(gòu)建紅細(xì)胞清除免疫復(fù)合物體外模型；運(yùn)用激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞技術(shù)觀察并分析豬紅細(xì)胞對熒光桿菌的免疫粘附及熒光桿菌轉(zhuǎn)移至巨噬細(xì)胞的免疫遞呈過程；利用流式細(xì)胞技術(shù)分析豬CR1-like在紅細(xì)胞遞呈免疫復(fù)合物過程中的分子機(jī)制。結(jié)果：分離所得PAM經(jīng)復(fù)蘇培養(yǎng),于倒置顯微鏡下觀察可見細(xì)胞多呈圓形,形態(tài)大小均一,活力較好,呈半貼壁狀態(tài)。加入臺(tái)盼藍(lán)染色液,鏡檢計(jì)數(shù)得細(xì)胞存活率為97.2%；PAM復(fù)蘇培養(yǎng)體系中加入墨汁進(jìn)行培養(yǎng),于倒置顯微鏡下鏡檢可見細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)有吞噬顆粒,計(jì)算得PAM吞噬率為98.8%；WT E.coli經(jīng)FITC染色標(biāo)記后,于正置顯微鏡下觀察可見,菌體呈短棒狀,大小為1-2gm；熒光場下,WT E.coli表現(xiàn)較強(qiáng)的綠色熒光,菌體熒光標(biāo)記率為92.3%；激光共聚焦顯微鏡觀察豬紅細(xì)胞、PAM、熒光大腸桿菌共孵育體系可見2h5min、...

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＰＡＭ復(fù)蘇培養(yǎng)及其吞隨活性鏡檢結(jié)果??

一，活為較好，呈半貼壁狀態(tài)。加入臺(tái)盼藍(lán)染色液，鏡檢計(jì)數(shù)得細(xì)胞存活率為９７．２％?（如??圖１Ａ所示）。??ＰＡＭ復(fù)蘇培養(yǎng)體系中加入墨汁進(jìn)行培養(yǎng)，于倒置顯微鏡下鏡檢可見細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞內(nèi)??有吞嗤顆粒，計(jì)算得ＰＡＭ吞隨率為９８．８％?（如圖１Ｂ所示），可用于后續(xù)試驗(yàn)。??隣拓．．．扣每遂....

圖２?ＷＴ?￡．ｃｏＵ的Ｆ打Ｃ標(biāo)記結(jié)果??＇

ＷＴＥｃｏ／ｚ？經(jīng)Ｆ打Ｃ染色標(biāo)記后，于正置顯微鏡下觀察可見，菌體呈短棒狀，大小為??１－２叫１１；巧光場下，ＷＴ表現(xiàn)較強(qiáng)的綠色巧光，表明菌體標(biāo)記成功，且計(jì)算得菌體??巧光標(biāo)記率為９２．３％?（如圖２所示）；菌體Ｗ?ＰＢＳ緩沖液重懸移至激光共聚焦顯微鏡下??進(jìn)行渾滅時(shí)間檢測，可見，....

圖３?ＰＡＭ競爭性結(jié)合黃光大腸桿菌觀察結(jié)果??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＡＭ?ｃｏｍｐｅｔｉｖｅ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??

３．１激光共聚焦顯微鏡觀察ＰＡＭ競爭性結(jié)合焚光大厥桿菌??經(jīng)新鮮兔血清致敏的ＦＩＴＣ－ＷＴＥ．ＣＯ＆？先與紅細(xì)胞解育，再與肺泡巨嗤細(xì)胞共賂育，??轉(zhuǎn)入活細(xì)胞工作站，Ｗ激光共聚焦顯微鏡觀察其轉(zhuǎn)移過程（圖３）。顯微鏡下觀察可見，??巧光巧菌可分別粘附于豬紅細(xì)胞表面或ＰＡＭ表面，觀察時(shí)....

圖４?ＰＡＭ競爭性結(jié)合巧光大腸桿菌流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ｆｌｏｗ?ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＰＡＭ?ｃｏｍｐｅｔｉｖｅ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??

３．２流式細(xì)胞術(shù)檢測ＰＡＭ競爭性結(jié)合焚光大腸桿菌??上述共贈(zèng)育體系中將豬紅細(xì)化裂解，制備樣本，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測ＰＡＭ的平均萊??光強(qiáng)度。檢測結(jié)果顯示，共艇育體組ＰＡＭ平均巧光強(qiáng)為６３２．０４?＋?４４．８２?（如圖４Ｃ所示），??對照組ＰＡＭ的巧光強(qiáng)度值均值為５．３３?＋化０８?....

本文編號(hào)：3955169