為了解動物源大腸埃希菌對氟喹諾酮類藥物的耐藥情況及其與gyrA基因突變的聯(lián)系,采用微量肉湯稀釋法測定200株豬雞源大腸埃希菌對恩諾沙星和氧氟沙星的最低抑菌濃度(MIC);對大腸埃希菌的gyrA基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物進(jìn)行變性高效液相色譜(DHPLC)檢測和序列測定。結(jié)果表明,200株動物源大腸埃希菌對恩諾沙星和氧氟沙星的耐藥率分別為44.5%和41.0%;144株大腸埃希菌gyrA基因產(chǎn)物的DHPLC圖譜有異常峰型,即核苷酸突變率為72.0%;測序證實(shí)gyrA基因存在5個突變位點(diǎn),其中2個位點(diǎn)的突變可導(dǎo)致Ser83→Leu和Asp87→Asn/Tyr,突變率分別為54.0%和24.0%,其余3個位點(diǎn)為同義突變點(diǎn);結(jié)合恩諾沙星耐藥情況可知,敏感菌株gyrA基因的氨基酸突變率最低(18.5%),其次為中介菌株(56.5%),耐藥菌株最高(78.6%),氧氟沙星測試結(jié)果與此趨勢一致。由此可知動物源大腸埃希菌gyrA基因突變引起的氨基酸替代與氟喹諾酮耐藥高度相關(guān)。

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圖1大腸埃希菌gyrA基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

表2藥敏試驗(yàn)結(jié)果Table2Resultsofantimicrobialsusceptibilitytest抗菌藥物Antimicrobial耐藥Resistant中介Intermediate敏感SusceptibleNumber%Number....

圖2大腸埃希菌gyrA基因片段DHPLC圖譜

對DHPLC圖譜呈異常峰型的菌株進(jìn)行PCR序列測定,發(fā)現(xiàn)gyrA基因在本研究擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)共有5個核苷酸突變位點(diǎn),其中3個為同義突變,另2個位點(diǎn)的突變導(dǎo)致了Ser83→Leu和Asp87→Asn/Tyr。其中Ser83→Leu的突變率為54.0%,Asp87→Asn的突變率為23.5....

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