山羊多能性干細(xì)胞包括：山羊胚胎干細(xì)胞(Embryonic Stem Cell, ESCs),山羊胚胎生殖細(xì)胞(Embryonic Germ Cell, EGCs)和山羊誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(Induced Pluripotent Stem cells, iPSc)。由于對山羊體外的培養(yǎng)體系和表觀調(diào)控因素仍然不清楚,導(dǎo)致山羊ESCs和EGCs的研究仍沒有成功建系的報(bào)道。而iPS細(xì)胞技術(shù)的出現(xiàn),為家畜多能性細(xì)胞研究提供了新的途徑和可替代的細(xì)胞來源。本實(shí)驗(yàn)以關(guān)中奶山羊?yàn)閷?shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?通過從體內(nèi)受精和發(fā)育的囊胚中分離出多能性細(xì)胞,嘗試篩選適合山羊多能性細(xì)胞在體外培養(yǎng)的條件；另外,本實(shí)驗(yàn)采用山羊胎兒成纖維細(xì)胞(Goat Embryonic Fibroblasts, GEF)為供體細(xì)胞,通過逆轉(zhuǎn)錄病毒攜帶的Oct4/Sox2/Klf4/c-Myc四個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,對山羊體細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)重編程,并且將誘導(dǎo)重編程細(xì)胞定向轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)樣細(xì)胞和卵母細(xì)胞樣細(xì)胞。 主要獲得以下結(jié)論： 1.山羊多能性細(xì)胞培養(yǎng)體系的優(yōu)化 本實(shí)驗(yàn)共超排處理了25只關(guān)中奶山羊,總共獲得胚胎253枚,其中發(fā)育到2-16細(xì)胞的胚胎39枚、桑椹胚113...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 動物多能干細(xì)胞的研究
        1.1 動物胚胎干細(xì)胞研究
            1.1.1 小鼠胚胎干細(xì)胞的研究
            1.1.2 人類胚胎干細(xì)胞的研究
            1.1.3 家畜胚胎干細(xì)胞的研究
        1.2 誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞的研究
            1.2.1 多能性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子
            1.2.2 受體細(xì)胞的選擇
            1.2.3 誘導(dǎo)細(xì)胞重編程的方法
            1.2.4 多能性細(xì)胞的鑒定
        1.3 多能干細(xì)胞應(yīng)用前景
            1.3.1 再生醫(yī)學(xué)與藥物篩選
            1.3.2 發(fā)育與基因表觀遺傳調(diào)控
            1.3.3 動物轉(zhuǎn)基因克隆與育種
    第二章 體細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化研究
        2.1 轉(zhuǎn)分化的研究進(jìn)展
        2.2 轉(zhuǎn)分化的分類
            2.2.1 成體干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化
            2.2.2 體細(xì)胞轉(zhuǎn)分化
        2.3 體細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的應(yīng)用前景
試驗(yàn)研究
    第三章 山羊多能干細(xì)胞培養(yǎng)條件的篩選與鑒定
        3.1 材料與方法
            3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 山羊體內(nèi)胚胎的獲取
            3.2.2 山羊多能干細(xì)胞的分離
            3.2.3 培養(yǎng)條件對山羊ICM貼壁和多能性細(xì)胞培養(yǎng)的影響
            3.2.4 培養(yǎng)基對山羊多能性細(xì)胞分離的影響
            3.2.5 小分子化合物對山羊多能性細(xì)胞分離和培養(yǎng)的影響
            3.2.6 傳代方法對山羊多能性細(xì)胞培養(yǎng)的影響
            3.2.7 山羊多能性細(xì)胞的鑒定
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
    第四章 誘導(dǎo)山羊體細(xì)胞重編程及其鑒定
        4.1 材料和方法
            4.1.1 試驗(yàn)材料
            4.1.2 試驗(yàn)方法
        4.2 結(jié)果
            4.2.1 山羊體細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
            4.2.2 山羊成纖維細(xì)胞(GEF)生長曲線
            4.2.3 山羊GEF細(xì)胞的誘導(dǎo)重編程
            4.2.4 逆轉(zhuǎn)錄病毒感染效率的測定
            4.2.5 對山羊誘導(dǎo)多能性細(xì)胞進(jìn)行鑒定
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
    第五章 山羊體細(xì)胞定向轉(zhuǎn)分化研究
        5.1 材料和方法
            5.1.1 試驗(yàn)材料
            5.1.2 試驗(yàn)方法
        5.2 結(jié)果
            5.2.1 對重編程不同時(shí)間成纖維細(xì)胞特異基因表達(dá)的檢測
            5.2.2 體細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為神經(jīng)樣細(xì)胞
            5.2.3 對轉(zhuǎn)分化的神經(jīng)樣細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光檢測
            5.2.4 體細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為卵母細(xì)胞樣細(xì)胞
            5.2.5 對轉(zhuǎn)分化的卵母細(xì)胞樣細(xì)胞進(jìn)行核染色
            5.2.6 對獲得的卵母細(xì)胞樣細(xì)胞進(jìn)行顯微操作
        5.3 討論
        5.4 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)與進(jìn)一步研究的課題
參考文獻(xiàn)
縮略詞
致謝
作者簡介



本文編號：3951403