為建立一種快速、特異、靈敏的A型塞尼卡病毒(SVA)檢測方法,通過比對我國不同地區(qū)SVA流行毒株的VP1基因序列,在其保守區(qū)域設(shè)計了1組引物和探針,通過條件優(yōu)化,建立了基于TaqMan探針的熒光定量RT-PCR檢測方法。用該方法檢測口蹄疫病毒、豬瘟病毒、日本腦炎病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒等均不發(fā)生交叉反應(yīng)。敏感性分析顯示,該方法的最低檢出量為278拷貝/μL,比常規(guī)RT-PCR的靈敏度高100倍。重復(fù)性分析顯示,所建立方法的批內(nèi)變異系數(shù)為0.3%～1.0%,批間變異系數(shù)為0.8%～2.0%,具有良好的穩(wěn)定性。進一步對16份疑似SVA感染的臨床病料檢進行了檢測,結(jié)果顯示8份為SVA核酸陽性。提示建立的檢測方法可以用于臨床SVA感染的鑒別診斷,為我國SVA的診斷和控制提供了良好的技術(shù)支撐。

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【文章目錄】：
1材料與方法
    1.1材料
    1.2方法
2結(jié)果
    2.1引物序列的設(shè)計合成
    2.2質(zhì)粒標準品的制備
    2.3熒光定量PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化及標準曲線的繪制
    2.4特異性試驗
    2.5敏感性試驗
    2.6重復(fù)性試驗
    2.7臨床病料檢測
3討論



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