為建立基于重組酶聚合酶等溫擴增(RPA)技術的金黃色葡萄球菌快速檢測方法,本研究根據(jù)該菌耐熱核酸酶nuc基因的保守序列,設計特異性RPA擴增引物,并經反應條件的優(yōu)化、特異性及靈敏度檢測。結果顯示:建立的金黃色葡萄球菌快速檢測方法可在37℃孵育35 min特異性檢測金黃色葡萄球菌,而對其它病原的檢測結果為陰性,特異性較強;對該菌的純培養(yǎng)物和人工污染該菌的牛奶樣品中的最低檢出限均為10 cfu,敏感性高。利用該方法和國標培養(yǎng)法同時檢測市場購買的牛奶樣品和豬肉樣品,結果顯示二者檢測結果一致。本研究建立的RPA方法操作簡單、反應快速、特異性強、靈敏度高且不依賴于昂貴的儀器設備,適用于基層實驗室檢測。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株與檢測樣品
    1.2 主要試劑
    1.3 引物的設計與合成
    1.4 細菌培養(yǎng)和基因組DNA提取
    1.5 RPA反應體系和反應條件的優(yōu)化
    1.6 RPA的特異性試驗
    1.7 RPA檢測金黃色葡萄球菌的靈敏度試驗
    1.8 RPA檢測金黃色葡萄球菌人工污染牛奶樣品的靈敏度試驗
    1.9 牛奶和肉制品的檢測
2 結果
    2.1 金黃色葡萄球菌nuc基因RPA擴增結果
    2.2 RPA反應溫度與反應時間的優(yōu)化結果
    2.3 RPA的特異性試驗結果
    2.4 RPA檢測金黃色葡萄球菌的靈敏度試驗結果
    2.5 RPA檢測金黃色葡萄球菌人工污染牛奶樣品的靈敏度試驗結果
    2.6 牛奶和肉制品的檢測結果
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