抗繆勒氏管激素(Anti-Müllerian Hormone;AMH)又稱繆勒氏管抑制物,是胚胎發(fā)育階段控制性腺分化的重要激素之一。主要負(fù)責(zé)雄性動(dòng)物早期胚胎輸卵管性腺前體的退化,以及雌性家禽早期胚胎右側(cè)輸卵管的退化。但是AMH在胚胎發(fā)育早期階段對(duì)性腺分化和輸卵管前體退化的分子學(xué)機(jī)制依然尚未明確。近年來(lái)基因組精確編輯技術(shù)的突破性進(jìn)展為AMH功能研究提供了良好的技術(shù)支持。尤其是CRISPR/Cas9的出現(xiàn),使得內(nèi)源性影響AMH的表達(dá)成為可能。作為RNA引導(dǎo)的、具有切割酶活性的核酸酶系統(tǒng),CRISPR/Cas9的工作效率很大程度上依賴于sgRNA的靶向效率和外源核苷酸的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。因此本次試驗(yàn)從提高sgRNA的靶向能力和SpCas9的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率兩方面對(duì)靶向雞AMH基因的CRISPR/Cas9敲除系統(tǒng)進(jìn)行優(yōu)化,從而提高CRISPR/Cas9對(duì)雞AMH基因的編輯效率。1、為了提高sgRNA對(duì)雞AMH基因的靶向效率,本試驗(yàn)構(gòu)建了靶向雞AMH基因第一外顯子的成對(duì)sgRNA敲除載體pX330-U6-AMHsg1_dBsaI-CBh-SpCas9和pX330-U6-AMHsg2_...

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1繆勒氏管退化的調(diào)控機(jī)制圖解(Allardetal.,2000)

圖1-1繆勒氏管退化的調(diào)控機(jī)制圖解(Allardetal.,2000tionmechanismduringcranialMüllerianductregression(A性腺發(fā)育中的作用H的功能與哺乳動(dòng)物類似，在胚胎發(fā)育時(shí)期會(huì)引ehringeretal....

圖2-1雞AMH基因靶位點(diǎn)的選擇Fig.2-1SelectionofCas9targetsiteonChickenAMHgene

pCAG-FGCAACGTGCTGGTTATTGTGAMH-TA-FGTGTGCCGCCTGAAGATGGAAMH-TA-RAATGCTGCTGCTCCAGAACCAA2.2試驗(yàn)方法2.2.1雞AMH基因敲除表達(dá)載體構(gòu)建通過(guò)美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心網(wǎng)站（https:....

圖2-2雞AMH敲除表達(dá)載體的構(gòu)建Fig.2-2ConstructionofvectorforKOChickenAMHgene用引物AMHsg1-F/AMHsg1-R（表2-1）進(jìn)行Annealing獲得20bp靶向雞基因組

圖2-2雞AMH敲除表達(dá)載體的構(gòu)建Fig.2-2ConstructionofvectorforKOChickenAMHgene用引物AMHsg1-F/AMHsg1-R（表2-1）進(jìn)行Annealing獲得20bp靶向雞基因MH-target1....

圖2-3合成sgRNA的退火擬合程序Fig.2-3ProcedureforsgRNAannealing

圖2-2雞AMH敲除表達(dá)載體的構(gòu)建Fig.2-2ConstructionofvectorforKOChickenAMHgene引物AMHsg1-F/AMHsg1-R（表2-1）進(jìn)行Annealing獲得20bp靶向雞target1位置的s....

本文編號(hào)：3944760