剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種可以感染幾乎所有溫血?jiǎng)游锏膶Ｐ约?xì)胞內(nèi)寄生原蟲。該寄生蟲入侵和感染宿主細(xì)胞需要其分泌細(xì)胞器所分泌的蛋白,其中包括微線體蛋白。近年來,CRISPR/Cas9技術(shù)已經(jīng)成為分子生物學(xué)和功能基因組學(xué)研究的重要工具,本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)對(duì)弓形蟲Ⅰ型蟲株RH和Ⅱ型蟲株P(guān)RU的微線體蛋白mic3基因進(jìn)行敲除。通過單克隆的篩選和鑒定,成功獲得了2種蟲株的mic3敲除株。之后對(duì)RH敲除株進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)mic3缺失可以輕微提高蟲體在體外培養(yǎng)時(shí)的生長(zhǎng)速度以及對(duì)小鼠的毒力。本研究不僅說明了CRISPR/Cas9技術(shù)可以應(yīng)用到弓形蟲的基因敲除和改造上,并且不受弓形蟲蟲株的限制,同時(shí)也為進(jìn)一步研究mic3在蟲體中的功能奠定基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蟲株與細(xì)胞
    1.2 培養(yǎng)基與試劑
    1.3 弓形蟲的培養(yǎng)
    1.4 敲除質(zhì)粒和同源模板質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 弓形蟲的轉(zhuǎn)染
    1.6 陽性克隆的篩選
    1.7 陽性克隆的鑒定
    1.8 空斑試驗(yàn)
    1.9 小鼠毒力試驗(yàn)
2 結(jié)果
    2.1 mic3基因靶點(diǎn)的選擇和敲除質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 弓形蟲RH株和PRU株mic3基因敲除株的篩選和鑒定
    2.3 mic3敲除株穩(wěn)定性的檢測(cè)
    2.4 RH△MIC3敲除株的表型研究
3 討論



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