腫瘤抑制因子p53被稱為“基因組衛(wèi)士”，在細胞的DNA修復(fù)過程中發(fā)揮著極為重要的作用。同時p53在細胞中具有誘導(dǎo)細胞凋亡、參與細胞周期捕獲、參與細胞代謝和抗病毒等功能。流感病毒感染細胞后，p53的表達量得以累積，IRF9的表達也明顯上升。流感病毒感染p53敲除型小鼠與p53野生型小鼠后，p53敲除型小鼠的臨床癥狀、肺臟的病理變化及流感病毒滴度均要嚴重于p53野生型小鼠。這表明p53與宿主抗流感病毒反應(yīng)具有著密切的關(guān)系。 本研究首先利用流感病毒感染p53正常及p53下調(diào)表達的A549細胞，對細胞中病毒的復(fù)制水平和病毒滴度差異進行比較，了解清楚p53是否直接參與細胞抑制流感病毒復(fù)制的過程。同時檢測Ⅰ型干擾素信號通路中多個抗病毒基因的表達差異，間接反映流感病毒感染后，p53對Ⅰ型干擾素信號通路的影響。結(jié)果表明，流感病毒感染后，p53直接影響著Ⅰ型干擾素信號通路中多個抗病毒相關(guān)基因的表達；下調(diào)p53表達后，IRF9、IRF7、RIG-I、ISG20、ISG15、GBP1和OAS1等多個基因的mRNA表達量均顯著下降。Ⅰ型干擾素通路在機體抗流感過程中發(fā)揮著非常重要的作用。這表明流感病毒感染后，p...

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【學(xué)位級別】：博士

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摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1. 流感病毒
        1.1.1 概述
        1.1.2 流感病毒的分子結(jié)構(gòu)及致病基礎(chǔ)
        1.1.3 流感病毒的復(fù)制周期
        1.1.4 流感病毒疫苗進展
    1.2. 腫瘤抑制因子 p53
        1.2.1 p53 的曲折認知路
        1.2.2 p53 的分子生物學(xué)特性與功能
        1.2.3 p53 與先天性免疫及獲得性免疫的關(guān)系
        1.2.4 p53 抗病毒研究進展
        1.2.5 p53 與Ⅰ型干擾素之間的關(guān)系
    1.3. 干擾素誘導(dǎo)蛋白 GBP1
        1.3.1 hGBP1 的分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)活性
        1.3.2 hGBP1 抗病毒及多類病原微生物的能力
        1.3.3 hGBP1 內(nèi)皮細胞相關(guān)的作用
        1.3.4 hGBP1 的抗癌功能
        1.3.5 hGBP1 的其他特性
    1.4. 本研究的目的及意義
第二章 流感病毒感染過程中 p53 對干擾素信號通路的影響
    2.1. 前言
    2.2. 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3. 結(jié)果
        2.3.1 siRNA 干擾效率摸索
        2.3.2 流感病毒感染不影響 p53 mRNA 的表達量
        2.3.3 流感病毒感染后，p53 在Ⅰ型干擾素信號通路的活化過程中發(fā)揮著重要作用
        2.3.4 下調(diào) p53 表達顯著加快流感病毒在細胞內(nèi)的復(fù)制水平
    2.4. 討論
第三章 p53 促進Ⅰ型干擾素通路活化的研究
    3.1. 前言
    3.2. 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3. 結(jié)果
        3.3.1 p53 蛋白可以促進干擾素誘導(dǎo)的干擾素刺激應(yīng)答元件（IFN-stimulated response element, ISRE）的激活
        3.3.2 干擾素可以誘導(dǎo) p53 mRNA 上調(diào)表達
        3.3.3 下調(diào) p53 表達顯著減弱干擾素對多個 ISGs 的誘導(dǎo)能力
        3.3.4 p53 在干擾素發(fā)揮的抗流感病毒過程中具有重要作用
    3.4. 討論
第四章 干擾素刺激基因 hGBP1 抗流感病毒作用及其病毒逃逸機制解析
    4.1. 前言
    4.2. 材料與方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 流感病毒感染，hGBP1 表達顯著上升
        4.3.2 hGBP1 過表達可以抑制流感病毒的復(fù)制
        4.3.3 hGBP1 K51A 過表達不能抑制流感病毒的復(fù)制
        4.3.4 流感病毒 NS1 能夠與 hGBP1 結(jié)合
        4.3.5 hGBP1 第 51 位賴氨酸是其與 NS1 結(jié)合所必須的
        4.3.6 NS1123-144 位氨基酸序列是 NS1 與 hGBP1 結(jié)合所必需的
        4.3.7 NS1 可以抑制 hGBP1 的 GTPase 活性
        4.3.8 NS1 拮抗 hGBP1 介導(dǎo)的抗病毒能力
    4.4. 討論
第五章 p53 直接轉(zhuǎn)錄調(diào)控抗流感分子 hGBP1 表達
    5.1. 前言
    5.2. 材料與方法
        5.2.1 材料
        5.2.2 方法
    5.3. 結(jié)果
        5.3.1 CHIP-on-Chip 方法尋找 p53 調(diào)控的靶基因
        5.3.2 hGBP1 為潛在的 p53 轉(zhuǎn)錄激活靶基因
        5.3.3 p53 轉(zhuǎn)錄激活 hGBP1 啟動子序列
        5.3.4 hGBP1 啟動子序列 p53 RE2 與 p53 RE3 基序為 p53 結(jié)合靶位點
        5.3.5 流感病毒感染或干擾素刺激后，p53 對 hGBP1 的正常表達具有不可缺少的作用
    5.4. 討論
第六章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3944219