產(chǎn)腸毒屬性大腸桿菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）是人和多種動物感染腹瀉的重要病原菌之一，引起新生仔豬腹瀉和死亡的幾率非常高。黏附素和腸毒素是ETEC致病過程中的主要致病因子，他們在致病過程中缺一不可。其中黏附素結合到宿主易感染的上皮細胞是ETEC感染的第一步，也是最重要的關鍵步驟。目前引起仔豬腹瀉的菌毛抗原主要有K88、K99、987P、F41等類型。本試驗選擇987P菌毛抗原，并將擴增出的987P基因片段克隆到大腸桿菌與干酪乳桿菌穿梭質粒載體中，從而構建了pLA-987P重組質粒，在將重組質粒電轉化到干酪乳桿菌中，得到了重組干酪乳桿菌pLA-987P/L.casei，通過SDS-PAGE、Western blot、間接免疫熒光及流式細胞術等來檢測重組蛋白的表達情況，結果表明，融合蛋白成功的展示在了干酪乳桿菌表面，我們將獲得的重組干酪乳桿菌命名為pLA-987P/L.casei。 將鑒定正確的重組干酪乳桿菌pLA-987P/L.casei口服接種SPF級BABL/c小鼠，同時將獲得的重組菌同pLA-K99-K88-LTB/L.casei混...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌的概述及其疫苗的研究進展
        1.1.1 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌毛黏附素的研究進展
        1.1.2 腸毒素
        1.1.3 ETEC 疫苗的研究進展
    1.2 乳酸菌作為抗原呈遞載體的研究進展
        1.2.1 乳酸菌簡介
        1.2.2 乳酸菌益生功能的研究現(xiàn)狀
        1.2.3 乳酸菌作為外源抗原呈遞載體的優(yōu)越性
        1.2.4 乳酸菌對機體免疫作用的影響
        1.2.5 乳酸菌作為口服疫苗呈遞載體的應用
    1.3 研究的目的與意義
第二章 重組 ETEC 987P 干酪乳桿菌的構建
    2.1 材料
        2.1.1 質粒和菌株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設備
    2.2 方法
        2.2.1 重組表達載體 pLA-987P 的構建
        2.2.2 ETEC 987P 重組干酪乳桿菌表達載體的構建
        2.2.3 ETEC 987P 重組干酪乳桿菌的鑒定
        2.2.4 外源蛋白在乳酸菌表面的定位
    2.3 結果
        2.3.1 ETEC 987P 菌毛基因 PCR 擴增
        2.3.2 重組質粒的酶切鑒定結果
        2.3.3 PCR 擴增干酪乳桿菌轉化子的結果
        2.3.4 Western blot 蛋白表達檢測結果
        2.3.5 間接免疫熒光法鑒定重組蛋白在乳酸菌表面的表達
        2.3.6 流式細胞術鑒定外源蛋白在干酪乳桿菌表面的表達
    2.4 討論
    2.5 結論
第三章 重組 ETEC 987P 干酪乳桿菌免疫小鼠研究
    3.1 材料
        3.1.1 試驗動物
        3.1.2 菌株
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 免疫用重組干酪乳桿菌懸液的制備
        3.2.2 試驗動物的分組及免疫
        3.2.3 樣本采集
        3.2.4 間接 ELISA
        3.2.5 淋巴細胞的免疫學試驗
        3.2.6 細胞因子的檢測
        3.2.7 小鼠攻毒保護性試驗
    3.3 結果
        3.3.1 重組蛋白的純化結果
        3.3.2 血清中 ETEC 987P 特異性 IgG 效價
        3.3.3 糞便中抗 987P 特異性 sIgA 效價的測定
        3.3.4 小腸沖洗液和氣管沖洗液中特異性 sIgA 效價的測定
        3.3.5 血清中 IgG 抗體亞類的檢測結果
        3.3.6 淋巴細胞增殖實驗
        3.3.7 細胞因子的檢測結果
        3.3.8 小鼠的攻毒保護結果
    3.4 討論
    3.5 結論
參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3925921