【目的】研究羊口瘡病毒008蛋白的功能,用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)008基因,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析�！痉椒ā客ㄟ^(guò)重慶臨床分離株擴(kuò)增得到008基因片段,將其連接到pET-28a(+)載體上,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒,誘導(dǎo)表達(dá)該蛋白;對(duì)008蛋白利用ProtScale程序分析疏水性,TMHMM server v.2.0分析跨膜區(qū),SignalP 5.0 server預(yù)測(cè)信號(hào)肽以及通過(guò)Protean進(jìn)行B細(xì)胞抗原表位預(yù)測(cè)分析�！窘Y(jié)果】羊口瘡008基因可以在E.coli中表達(dá),重組蛋白分子量大小約為56 kd,主要以包涵體形式表達(dá)且與陽(yáng)性血清產(chǎn)生特異性結(jié)合反應(yīng),具有良好的抗原性。生物信息學(xué)研究顯示,008蛋白屬于疏水性蛋白,無(wú)跨膜區(qū)及信號(hào)肽區(qū)域,其中B細(xì)胞表位可能存在11個(gè)。【結(jié)論】構(gòu)建的pET-28a(+)-008質(zhì)粒在IPTG誘導(dǎo)下成功表達(dá)008蛋白,008蛋白具有良好的抗原性。

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【部分圖文】：

圖1羊口瘡病毒重慶分離株008基因的擴(kuò)增

將pET-28a(+)質(zhì)粒與pMD19-T-008質(zhì)粒用NdeI、HindIII雙酶切后連接轉(zhuǎn)化置大腸桿菌BL21(DE3)中,構(gòu)建得到重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)-008,挑取陽(yáng)性單克隆進(jìn)行PCR以及雙酶切鑒定,得到1500bp左右片段(圖2),測(cè)序比對(duì)結(jié)果正確,結(jié)果表....

圖2pET-28a(+)-008質(zhì)粒雙酶切鑒定

圖1羊口瘡病毒重慶分離株008基因的擴(kuò)增2.3重組菌的誘導(dǎo)表達(dá)及SDS-PAGE分析

圖3008蛋白8、16h誘導(dǎo)表達(dá)SDS-PAGE結(jié)果

取重組誘導(dǎo)菌不同誘導(dǎo)時(shí)間的菌體分別進(jìn)行SDS-PAGE分析,試驗(yàn)確定IPTG誘導(dǎo)16h表達(dá)量最大,表達(dá)產(chǎn)物約為56kd,與預(yù)期蛋白條帶相符,而未誘導(dǎo)菌和誘導(dǎo)后的空載體均未出現(xiàn)次蛋白條帶(圖3、圖4)。對(duì)超聲裂解細(xì)菌的上清和沉淀進(jìn)行SDS-PAGE分析,表明重組蛋白以包涵體的形....

圖8008蛋白綜合預(yù)測(cè)結(jié)果

圖7SignalP對(duì)008蛋白的信號(hào)肽預(yù)測(cè)3討論

本文編號(hào)：3921407