哺乳動(dòng)物卵泡在發(fā)育過(guò)程中,除少量發(fā)育成熟并排卵外,絕大部分發(fā)生退化、閉鎖。研究表明,卵泡閉鎖的主要誘因是顆粒細(xì)胞凋亡。目前已有人、鼠、牛、豬、綿羊和山羊等動(dòng)物的顆粒細(xì)胞凋亡及其調(diào)控機(jī)理的研究報(bào)道,但對(duì)水牛卵泡顆粒細(xì)胞凋亡及卵泡閉鎖的分子機(jī)制研究較少。為此,本試驗(yàn)首先對(duì)不同閉鎖程度水牛卵泡顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)基因及miRNA的表達(dá)規(guī)律進(jìn)行了分析,以了解顆粒細(xì)胞凋亡與卵泡閉鎖的關(guān)系,初步闡明水牛卵泡閉鎖的分子機(jī)制。其次,通過(guò)研究雌二醇(E2)對(duì)體外培養(yǎng)的水牛顆粒細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、凋亡相關(guān)基因和miRNA表達(dá)的影響,探索E2在調(diào)控水牛顆粒細(xì)胞凋亡過(guò)程中的作用,為優(yōu)化顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)條件以及進(jìn)一步了解水牛卵泡閉鎖機(jī)理奠定基礎(chǔ)。 一、不同閉鎖程度水牛卵泡顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)基因和miRNA的表達(dá)。 1.采用HE染色、DNA ladder分析和Tunel法檢測(cè)了HF、EF和PF三種不同閉鎖程度水牛卵泡顆粒細(xì)胞的凋亡狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),HF卵泡腔中無(wú)脫落的顆粒細(xì)胞,其中的顆粒細(xì)胞基因組DNA沒(méi)有出現(xiàn)明顯的DNAladder,細(xì)胞凋亡率為9.32%。EF卵泡內(nèi)壁結(jié)構(gòu)較松散,卵泡腔中可見(jiàn)到有少量脫落的顆粒細(xì)胞,其...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖1哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育一般模式

這一過(guò)程目前被認(rèn)為是卵泡發(fā)育的基本過(guò)程，并被廣泛認(rèn)可[2]。哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育一般過(guò)程如圖1所示。Primary 一 Pr??ntr麟丨lotllcia follicleP—^ Early.?,ra.follicle —T_\、 Granulosa 'follicle^ ....

圖2雌激素調(diào)控細(xì)胞調(diào)亡模式圖[82]

圖2雌激素調(diào)控細(xì)胞調(diào)亡模式圖[82]Fig.2ThetwomainpathwaysinvolvedinapoptosisofEstrogenregulation其他激素如生長(zhǎng)激素（growthhormone,GH)，抑制素（inhibin)和活化素（ac....

圖1-1不同閉鎖程度水牛卵泡HE染色結(jié)果

泡（EF)和晚期閉鎖卵泡（PF)三組。對(duì)各組卵泡進(jìn)行石蠟切片、HE染色，對(duì)其形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行描述（圖1-1)(表1-13)。'初步判斷對(duì)卵泡進(jìn)行的分類基本正確，可用于后’續(xù)試驗(yàn)。29

圖1-2不同閉鎖程度水牛卵泡顆粒細(xì)胞DNA電泳結(jié)果

明顯的梯狀條帶。EF和PF樣品基因組抹帶較濃，有大量的DNA降解成180-200bp大小的片段，出現(xiàn)明顯的梯狀條帶，即DNA“l(fā)adder”（圖1-2)�；蚪MDNA電泳結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明對(duì)卵泡進(jìn)行的分類判斷正確。30

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