脂肪酸去飽和酶-3(fatty acid desaturase 3, FAD3)基因編碼n-3多不飽和脂肪酸脫氫酶,能夠?qū)-6多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty aci ds, PUFAs)轉(zhuǎn)化成n-3 PUFAs。本試驗成功構(gòu)建基因打靶載體pCSN2-hF AD3和具有切割活性的pCas-Guide-1載體。利用CRISPR/Cas9技術(shù)將hFAD3基因定點整合到CSN2位點,研究hFAD3基因在乳腺細胞中特異表達,及其對脂肪酸相關(guān)基因表達的影響。結(jié)果表明,(1)外源基因已定點整合到了CSN2靶位點。(2)實時定量PCR檢測hFAD3基因在轉(zhuǎn)染后乳腺細胞和成纖維細胞中的表達結(jié)果顯示,乳腺細胞中hFAD3基因的表達量為成纖維細胞中的2.5倍(P<0.01),說明hFAD3基因的表達具有一定的乳腺特異性。(3)脂肪酸含量分析結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染后細胞n-6/n-3比值較對照細胞顯著下降(P<0.01)。(4)脂肪酸相關(guān)基因的表達檢測結(jié)果顯示,兩種細胞中脂肪分解相關(guān)基因(LPL、LIPE和PPARg)表達量大于脂肪合成相關(guān)基因(FASN、ACC和SCD)。(...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一部分 研究論文 CRISPR/Cas9介導hFAD3基因在奶牛CSN2位點定點整合研究
    前言
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 pCas-Guide載體構(gòu)建及活性檢測
            1.2.2 打靶載體的構(gòu)建
            1.2.3 pCas-Guide-1載體與pCSN2-hFAD3載體共轉(zhuǎn)染HST胎兒成纖維細胞與乳腺細胞及相關(guān)檢測
    2 結(jié)果
        2.1 pCas-Guide載體構(gòu)建及活性檢測
        2.2 打靶載體pCSN2-hFAD3的構(gòu)建
        2.3 pCas-Guide-1載體與pCSN2-hFAD3載體共轉(zhuǎn)染HST胎兒成纖維細胞與乳腺細胞
            2.3.1 轉(zhuǎn)染后細胞的鑒定及相關(guān)檢測
            2.3.2 單克隆細胞的篩選及鑒定
    3 討論
        3.1 β-酪蛋白啟動子及其對hFAD3基因表達的調(diào)控
        3.2 hFAD3基因表達對細胞中n-6/n-3比例的影響
        3.3 hFAD3基因表達對脂肪酸相關(guān)基因表達影響
    4 結(jié)論
    參考文獻
第二部分 文獻綜述 n-3 多不飽和脂肪酸去飽和酶基因及乳腺特異啟動子研究進展
    1 n-3多不飽和脂肪酸去飽和酶基因研究進展
    2 常用乳腺特異啟動子研究進展
    3 乳腺特異表達脂肪酸去飽和酶基因研究進展
    4 結(jié)語
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間的學術(shù)成果



本文編號：3901927