乳腺作為一種與哺乳動物繁殖周期密切相關(guān)的重要第二性征器官,其發(fā)育和泌乳受多重因素的調(diào)控,其中乳腺特異性轉(zhuǎn)錄因子STAT5a在調(diào)控乳腺發(fā)育及泌乳過程中有重要作用。有研究表明,催化組蛋白3第9位賴氨酸三甲基化(H3K9me3)的特異性組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶SUV39H1/2與染色質(zhì)濃縮和基因表達調(diào)控等密切相關(guān)。為了解SUV39H1/2基因在乳腺發(fā)育和泌乳過程中的作用,本研究擬采用RNA干擾技術(shù)探討SUV39H1/2基因表達下調(diào)對水牛乳腺上皮細胞增殖、乳腺發(fā)育及STAT5a等泌乳相關(guān)基因表達的影響,以闡明H3K9me3在調(diào)控水牛乳腺發(fā)育及泌乳方面的作用。研究取得如下結(jié)果。1.5UV39H1/2對水牛乳腺上皮細胞增殖以及泌乳相關(guān)基因表達的影響首先利用293T細胞包裝獲得SUV39H1/2-shRNA慢病毒,通過慢病毒感染水牛乳腺上皮細胞,觀察其對細胞增殖的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與未感染組相比,SUV39H1/2基因表達下調(diào)可以促進乳腺上皮細胞的增殖;流式細胞儀檢測細胞周期時發(fā)現(xiàn),實驗組細胞周期阻滯在S期,G0/G1期細胞比例無顯著差異,G2期比例顯著減少(P<0.05)。qRT-PCR結(jié)果顯示,5...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ｐＳｉｃｏ－ＧＦＰ載體骨架??Ｆｉｇ２－１?Ｖｅｃｔｏｒ?Ｂａｃｋｂｏｎｅ?ｏｆ?ｐＳｉｃｏ－ＧＦＰ??２－１?ＳＣ／Ｆ３９／／／／２ｓｈＲＮＡ

菌株：大腸桿菌Ｅ．ｃｏｌｉ?ＤＨ５廣購自全式金生物科技有限公司。??質(zhì)粒：基因表達的載體及基因克隆載體購自ＴａＫａＲａ公司。ｐＳｉｃｏ－ＧＦＰ的慢??病毒表達載體骨架圖譜見（圖２－１），廣西本地水�！觯樱茫疲常梗罚不虻模螅瑁遥危�??序列采用林浪，代小麗等人發(fā)表的文章［５....

圖２－２質(zhì)粒轉(zhuǎn)染２９３Ｔ細胞熒光檢測結(jié)果（４８ｈ?１００ｘ）??Ｆｉｇ．２－２?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋｉｎｇ?ｕｎｄｅｒ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（４８ｈ）??

８０００ｂｐ?＾？＾一??圖２－１病毒包裝質(zhì)粒酶切鑒定??Ｆｉｇ．?３－１?Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ?ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｖｅｃｔｏｒｓ?ｕｓｅｄ?ｉｎ?ｖｉｒｕｓ?ｐａｃｋｉｎｇ??Ｍｌ?：Ｓｕｐｅｒｃｏｉｌｅｄ?ｍａｒｋｅｒ?Ｍ２：?ｍａｒｋｅｒ?....

圖２－３?２９３Ｔ細胞病毒滴度測定（４８ｈ?１０〇ｘ）??Ｆｉｇ．２－３?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?Ｖｉｒａｌ?ｔｉｔｅｒ?ａｓｓａｙ?ｆｏｒ?２９３Ｔ?ｃｅｌｌ?（４８ｈ?１０〇ｘ）??

并且熒光強度逐漸增強。ＭＯＩ值為８００和１０００時，細胞生長未受到影響，??當ＭＯＩ值為１４００時，水牛乳腺上細胞空腔增多，培養(yǎng)基中死細胞數(shù)增多。因此??采用ＭＯＩ值為１０００的病毒濃度進行后續(xù)實驗（圖２－４）。??＿關(guān)??圖２－４不同ＭＯＩ值病毒感染水牛乳腺上皮細胞??Ｆｉｇ．....

圖３－２?啟動子ＰＣＲ擴增結(jié)果??Ｆｉｇ．３－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＳＴＡＴ５ａ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??－

序列對比顯示：克隆獲得水牛啟動子區(qū)域，與ＵＣＳＣ數(shù)據(jù)庫中的??基因上游２０００?ＢＰ啟動子區(qū)序列同源性達９９％。??■??圖３－２?啟動子ＰＣＲ擴增結(jié)果??Ｆｉｇ．３－２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＳＴＡＴ５ａ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??注：Ｍ：?Ｍａｒｋ....

本文編號：3900995