在腫瘤微環(huán)境中,TIGIT是表達(dá)在NK細(xì)胞,T細(xì)胞表面的一種抑制性受體,當(dāng)與配體CD155,CD112結(jié)合后會引起NK細(xì)胞,T細(xì)胞耗竭,從而促進(jìn)腫瘤的生長。通過研究靶向的TIGIT的單域抗體,阻斷TIGIT/CD155這一信號通路會增強(qiáng)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞的抗腫瘤應(yīng)答,延緩腫瘤生長,與傳統(tǒng)的單克隆抗體相比而言,單域抗體具有分子量小,能透過血腦屏障,易于改造和重組表達(dá)等優(yōu)點。將為腫瘤的診斷與治療以及藥物研發(fā)奠定堅實的基礎(chǔ),未來具有潛在應(yīng)用前景。本試驗首先克隆出TIGIT基因,并構(gòu)建TIGIT表達(dá)載體,以大腸桿菌為表達(dá)系統(tǒng),表達(dá)并純化TIGIT蛋白;以TIGIT蛋白作為抗原免疫成年健康雙峰駝,構(gòu)建TIGIT特異性噬菌體抗體庫,使用商品化、真核表達(dá)的TIGIT蛋白對構(gòu)建好的抗體庫進(jìn)行3輪的富集、篩選,經(jīng)Phage ELISA鑒定TIGIT蛋白結(jié)合特異性陽性克隆,將陽性克隆基因連接至原核表達(dá)載體pET-25b-SBP,采用低溫誘導(dǎo)進(jìn)行可溶性表達(dá),得到可溶性的抗TIGIT特異性單域抗體,經(jīng)ELISA鑒定其親和活性。本課試驗應(yīng)用噬菌體展示技術(shù)成功獲得了抗TIGIT的單域抗體,并在后續(xù)試驗中...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３?ＴＩＧＩＴ對腫瘤免疫循環(huán)的抑制作用結(jié)構(gòu)（引Ｍａｎｉｅｒｉ?ＮＡ．２０１７［２１］）??Ｆｉｇ．３?Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｃａｎｃｅｒ?Ｉｍｍｕｎｉｔｙ?Ｃｙｃｌｅ?ｂｙ?ＴＩＧＩＴ?（Ｍａｎｉｅｒｉ?ＮＡ．２０１７＾２１＾）??

?ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ?ＤＣｓ??Ｔｕｍｏｒ?ＩＬ－１０??〇ｃ??ＰＶＲ?＾?ＩｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓＪｏｎ??ＴＩＧＩＴ＿ｇ＿?ＴＩＧｒＴｌｆ?ｄｏｗｎｒ￡ｇｕｌａｔｅＣＤ８６??（Ｑ）（０）?Ｏ）?ｃｏｓ／ｃｏ，??ＮＫｃｅｌｌ?ＮＫ?ｃｅｌｌ?＾??Ｔｕｍ....

圖４不同抗體類型示意圖（引ＫｉｊａｎｋａＭ．２０１５［３３］）??Ｆｉｇ．４?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｔｙｐｅｓ（Ｋｉｊａｎｋａ?Ｍ．２０１５Ｐ＾）??

６?ＴｌＧＩＴ特異性單域抗體的篩癬制備及鑒定???ｍＡｂ??￣１５０ｋＤａ?ＨｃＡｂ?Ｎａｎｏｂｏｄｙ??／?￣９６?ｋＤａ?￣１５?ｋＤａ??Ｙ?ｍ?４ｎｍ［??通?２．５７？ｍ??８．５?ｎｍ??圖４不同抗體類型示意圖（引ＫｉｊａｎｋａＭ．２０１５［３３］）??Ｆｉｇ．４?Ｓ....

圖５?ＴＩＧＩＴ基因ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果??Ｆｉ．５?ＰＣＲ?ａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＴＩＧＩＴｅｎｅ??

１４?ＴＩ?ＧＩＴ特異性單域抗體的篩癬制備及鑒定???（２）菌體破碎上清用１０ＭＮａＯＨ調(diào)ＰＨ＝８，為除去多余雜質(zhì)，可用０．４５＾ｍｌ??濾器過濾至已平衡好的Ｎｉ－ＮＴＡ柱中，４°Ｃ過夜結(jié)合；??（３）第二天醉育結(jié)束后收集流穿液，加入１０倍體積的Ｗａｓｈｉｎｇ?ｂｕｆｆｅｒ洗漆，....

圖６?ＴＩＧＩＴ蛋白純化結(jié)果??Ｆｉ．６?ＴＩＧＩＴｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｒｅｓｓｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文?１５??Ｍ?１?２?３?４??ＫＤａ??１２０??＿＿?■??１００?——？－?￣??７０?￣?—??５０???４０＿ｒ??ｍｍｍ??３０—??園ｒ：：?＇?．?％??２５——??圖６?ＴＩＧＩＴ蛋白純化結(jié)果??Ｆｉｇ．６?ＴＩＧＩＴ?ｐｒｏｔｅｉｎ....

本文編號：3896725