布魯氏菌病(布病)是由布魯氏菌引起的世界范圍流行的人獸共患病,給畜牧業(yè)發(fā)展和人民健康帶來了巨大的危害。布病的診斷國家標準中所列方法是基于LPS抗原或全菌體蛋白來進行設計的,無法區(qū)分疫苗接種與野毒株感染引起的抗體反應,這不利于布病的清除。隨著蛋白組學的發(fā)展,利用高通量技術篩選具有診斷功能的蛋白分子成為可能。本研究利用免疫沉淀(IP)分離了布魯氏菌M28和M5-90接種羊180天血清反應蛋白,并利用高通量Label-free技術對其進行質譜分析。結果顯示:共檢測到1940個有效蛋白,按照差異倍數(shù)大于1.5,且在血清持續(xù)存在6個月的標準,篩選到71個差異表達蛋白,M28與M5-90相比上調14個,下調有23個,只在M28組表達19個,只在M5-90中表達15個。蛋白B0715、A0248、A0251、A0249、B0713、A0253和A0225在布魯氏菌接種后6個月內,M28組分別比M5-90組上調46.0、19.6、10.7、8.8、8.8、8.6和7.5倍。為了檢測7個差異倍數(shù)顯著的布魯氏菌蛋白的抗體反應性及標簽蛋白是否影響差異蛋白的抗體反應性,本文選擇3種原核系統(tǒng)表達差異蛋白,結合i...

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【學位級別】：碩士

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圖2-1裂解布魯氏菌全菌蛋白的方法比較

中國農業(yè)科學院碩士學位論文第二章IP篩選與布魯氏菌陽性血清反應的菌體蛋白92.3.1布魯氏菌全菌蛋白裂解方法的比較為了獲得布魯氏菌的全菌蛋白，分別用BugbusterMix+超聲、BugbusterMix+8M尿素、8M尿素以及BugbusterMix的方法來裂解布魯氏菌的全菌蛋....

圖2-3IP抗體濃度優(yōu)化

中國農業(yè)科學院碩士學位論文第二章IP篩選與布魯氏菌陽性血清反應的菌體蛋白10圖2-2M28和M5-90接種羊血清RBT檢測結果Figure2-2RBTtestresultsofM28andM5-90inoculatedsheep2.3.3IP抗體濃度優(yōu)化為了使布魯氏菌全菌蛋白與布....

圖2-2M28和M5-90接種羊血清RBT檢測結果

中國農業(yè)科學院碩士學位論文第二章IP篩選與布魯氏菌陽性血清反應的菌體蛋白10圖2-2M28和M5-90接種羊血清RBT檢測結果Figure2-2RBTtestresultsofM28andM5-90inoculatedsheep2.3.3IP抗體濃度優(yōu)化為了使布魯氏菌全菌蛋白與布....

圖2-4IP洗脫液的優(yōu)化

中國農業(yè)科學院碩士學位論文第二章IP篩選與布魯氏菌陽性血清反應的菌體蛋白111μg/μL（圖2-4E），其中1%SDS和50%乙二醇洗脫下來的蛋白量滿足測序要求，但由于乙二醇屬于有機試劑，對測序造成干擾，因此后續(xù)實驗選用1%SDS作為本實驗的洗脫液。圖2-4IP洗脫液的優(yōu)化Fig....

本文編號：3894379