發(fā)布時(shí)間：2024-02-03 03:22

　　根據(jù)肝螺桿菌和肺炎克雷伯氏菌的16S rRNA基因序列,設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性引物進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增,同時(shí)優(yōu)化退火溫度和引物濃度,篩選出最優(yōu)反應(yīng)條件組合。結(jié)果表明這兩對(duì)引物能夠在417bp和368bp處擴(kuò)增出目標(biāo)條帶,且特異性高。PCR擴(kuò)增的最佳退火溫度為54.4℃。肝螺桿菌和肺炎克雷伯氏菌的最佳引物濃度均為40 nmol/L。在上述條件下同時(shí)檢測(cè)肝螺桿菌和肺炎克雷伯氏菌DNA的敏感度為1pg,從反應(yīng)體系的配制到檢測(cè)完畢所需時(shí)間為4h。本實(shí)驗(yàn)建立的多重PCR可以同時(shí)檢測(cè)肝螺桿菌和肺炎克雷伯氏菌,本方法具有快速、特異性強(qiáng)、效率以及準(zhǔn)確率高的優(yōu)點(diǎn),為同時(shí)快速檢測(cè)上述兩種細(xì)菌奠定了良好的基礎(chǔ)。

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 肺炎克雷伯菌研究進(jìn)展
        1.1 肺炎克雷伯氏菌分布特點(diǎn)
        1.2 肺炎克雷伯氏菌的特點(diǎn)
        1.3 肺炎克雷伯氏菌感染途徑和易感因素
        1.4 肺炎克雷伯氏菌感染的癥狀及特點(diǎn)
        1.5 肺炎克雷伯氏菌感染的診斷和治療
        1.6 肺炎克雷伯氏菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展
    2. 肝螺桿菌的研究進(jìn)展
        2.1 肝螺桿菌的發(fā)現(xiàn)與分類
        2.2 肝螺桿菌的理化性質(zhì)
        2.3 肝螺桿菌的流行病學(xué)特征
        2.4 肝螺桿菌的傳播途徑
        2.5 肝螺桿菌的致病機(jī)制
        2.6 肝螺桿菌與相關(guān)疾病研究進(jìn)展
        2.7 肝螺桿菌檢測(cè)研究進(jìn)展
第二章 肝螺桿菌和肺炎克雷伯氏菌多重PCR檢測(cè)方法的建立
    1. 前言
    2. 材料與方法
        2.1 試驗(yàn)儀器
        2.2 菌株來(lái)源
        2.3 主要試劑
        2.4 試劑的配制
    3. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 菌種復(fù)蘇
        3.2 細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察及革蘭氏染色
        3.3 生化反應(yīng)鑒定
        3.4 細(xì)菌基因組DNA提取
        3.5 細(xì)菌DNA電泳
        3.6 細(xì)菌DNA濃度測(cè)定
        3.7 普通PCR擴(kuò)增
        3.8 20μl多重PCR擴(kuò)增體系
        3.9 多重PCR擴(kuò)增條件
        3.10 瓊脂糖凝膠的制備
        3.11 電泳膠的制備
        3.12 PCR產(chǎn)物的電泳檢測(cè)
        3.13 PCR擴(kuò)增片段的回收
        3.14 DNA片段測(cè)序
        3.15 多重PCR條件的優(yōu)化
        3.16 多重PCR引物特異性檢測(cè)
        3.17 單重PCR敏感度檢測(cè)
        3.18 多重PCR敏感度檢測(cè)
    4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 菌種復(fù)蘇結(jié)果
        4.2 革蘭氏染色結(jié)果
        4.3 細(xì)菌生化反應(yīng)結(jié)果
        4.4 細(xì)菌基因組 DNA 電泳
        4.5 細(xì)菌基因組DNA濃度測(cè)定結(jié)果
        4.6 引物擴(kuò)增效果
        4.7 兩種細(xì)菌擴(kuò)增片段測(cè)序結(jié)果
        4.8 多重PCR條件優(yōu)化結(jié)果
        4.9 多重PCR引物特異性檢測(cè)結(jié)果
        4.10 單一 PCR 敏感度檢測(cè)結(jié)果
        4.11 多重 PCR 敏感度檢測(cè)結(jié)果
    5. 討論
    6. 本章小結(jié)
第三章 結(jié)束語(yǔ)
    1.1 主要工作與創(chuàng)新點(diǎn)
    1.2 后續(xù)研究工作
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3893629