偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是一種嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的病毒性傳染病,該病的病原是偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)。PRV可以感染多種家畜和野生動物,豬是其天然宿主。近年來,疫苗的應用使偽狂犬病得到了有效控制,美國及部分歐洲國家甚至根除了該病。2012年,我國報道了多個接種偽狂犬病Bartha-K61株疫苗的豬場暴發(fā)了偽狂犬病新疫情。研究發(fā)現(xiàn),引起此次疫情的PRV毒株發(fā)生了多處變異,與經(jīng)典毒株屬于不同的系統(tǒng)發(fā)育學分支,且對宿主的致病力增強。目前關于新的PRV流行毒株致病力增強的詳細機制仍不清楚,而且毒株具有繼續(xù)變異的可能。因此,有必要建立快速評估PRV毒株致病力的方法。本研究利用同源重組法構(gòu)建了能夠穩(wěn)定表達NLuc熒光素酶的重組PRV(rPRVTJ-NLuc),并對該重組病毒的穩(wěn)定性、生長動力學以及熒光素酶活性進行了系統(tǒng)鑒定,結(jié)果表明,與親本毒株相比,重組病毒可以表達紅色熒光蛋白,其在PK-15細胞上具有傳代穩(wěn)定性,且其在PK-15細胞上的復制能力沒有發(fā)生明顯改變,能夠表達較高水平的熒光素酶,且熒光素酶水平與病毒滴度呈正相關。將該重組病毒rPRVTJ...

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1表達NLuc的重組PRV的構(gòu)建策略Fig.2.1SchematicrepresentationoftherecombinantPRVexpressingNLucluciferase

中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文如圖2.1所示的重組病毒的構(gòu)建策略，根據(jù)PRVTJ（GenBank序列號：KJ789182）US區(qū)設計左右同源臂引物P1F/P1R、P2F/P2R（表2.1）。以PRVTJ基因組DNA為模板，PCR擴增獲得位于US9基因兩側(cè)的....

圖2.3重組病毒的蝕斑形成與熒光表達Fig.2.3PlaquesformationandredfluorescenceexpressionofrPRVTJ-NLuc

定測序正確的轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染Vero細胞，24h后即可觀察到明顯00×），表明成功構(gòu)建了能夠表達DsRed的轉(zhuǎn)移載體。圖2.2轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染Vero細胞24h后的熒光表達.2.2Redfluorescenceexpressionofthetra....

圖2.2轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染Vero細胞24h后的熒光表達Fig.2.2RedfluorescenceexpressionofthetransfervectorinVerocells24hposttransfection

24h后即可觀察到明顯的紅色熒光（圖2.2，放大倍數(shù)200×），表明成功構(gòu)建了能夠表達DsRed的轉(zhuǎn)移載體。圖2.2轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)染Vero細胞24h后的熒光表達Fig.2.2Redfluorescenceexpressionofthetran....

圖2.4重組病毒的PCR鑒定

中國農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文將重組病毒在PK-15細胞中連續(xù)傳代至第20代，提取第1、5、15、20代的病毒基因組，利用引物P4F/P4R、P7F/P7R進行PCR擴增，鑒定重組病毒各代次中報告基因NLuc與DsRed的穩(wěn)定性。NLuc與DsRed....

本文編號：3892342