旨在研究馬鏈球菌獸疫亞種(Streptococcus equi ssp.zooepidemicus,SEZ)烯醇化酶(enolase,Eno)對小鼠肺泡巨噬細(xì)胞(RAW264.7)吞噬能力的影響。通過構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒獲得重組烯醇化酶(rEno),采用臺盼藍(lán)活細(xì)胞計(jì)數(shù)法,判定在不同處理濃度和時(shí)間下rEno蛋白對RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞毒性。將rEno蛋白與RAW264.7細(xì)胞共孵育后,用SEZ作用于細(xì)胞并檢測細(xì)胞吞菌數(shù)量,判斷RAW264.7細(xì)胞對SEZ的吞噬活性。進(jìn)一步通過活細(xì)胞穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)(SILAC)和蛋白質(zhì)譜分析技術(shù)(LC-MS/MS),篩選到RAW264.7細(xì)胞中可能與SEZ Eno存在相互作用的候選蛋白。結(jié)果發(fā)現(xiàn),10μg·mL^-1 rEno蛋白處理對RAW264.7細(xì)胞有明顯的細(xì)胞毒性,且10μg·mL^-1 rEno蛋白處理RAW264.7細(xì)胞2和4 h可顯著抑制其對SEZ的吞噬作用(P<0.01、P<0.05)。初步篩選到RAW264.7細(xì)胞中動力蛋白激活蛋白亞單位蛋白(dynactin subunit pr...

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圖1重組蛋白Eno的表達(dá)、純化與鑒定

圖2不同濃度rEno對RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞毒性

圖3rEno處理對RAW264.7細(xì)胞吞噬SEZ功能的影響

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