防御素(defensins)是動(dòng)物體內(nèi)先天性免疫系統(tǒng)的主要成員之一,具有廣譜的抗微生物活性,廣泛表達(dá)在動(dòng)物組織細(xì)胞中,它的表達(dá)受到多種因素的影響,其中益生菌是影響因素之一。本試驗(yàn)選用益生植物乳桿菌研究對(duì)體外培養(yǎng)的綿羊瘤胃上皮細(xì)胞內(nèi)防御素表達(dá)的影響。首先建立穩(wěn)定的綿羊瘤胃上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系,在無(wú)菌條件下獲取傳一代綿羊瘤胃上皮細(xì)胞,并通過(guò)形態(tài)學(xué)、繪制生長(zhǎng)曲線和免疫組化方法對(duì)其進(jìn)行鑒定,然后將活化并純化好的植物乳桿菌和體外培養(yǎng)的傳一代綿羊瘤胃上皮細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),通過(guò)不同的菌液濃度和不同的刺激時(shí)間,利用熒光定量PCR技術(shù)研究接受刺激后瘤胃上皮細(xì)胞中綿羊β-防御素-1(Sheep Beta-Defensin-1,SBD-1)基因表達(dá)水平的差異。結(jié)果表明：通過(guò)鑒定,證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的上皮細(xì)胞特征,并且生長(zhǎng)狀態(tài)良好,適合作為下一步研究的試驗(yàn)?zāi)Ｐ�。通過(guò)植物乳桿菌和瘤胃上皮細(xì)胞共培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn),當(dāng)菌液濃度為109cfu/ml刺激上皮細(xì)胞8h后,SBD-1的表達(dá)量達(dá)到最高水平,當(dāng)菌液濃度為108、107和106cfu/ml時(shí)的表達(dá)量與空白對(duì)照基本持平。通過(guò)比較當(dāng)菌液濃度為1010和109cfu/ml刺激...

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 防御素的研究進(jìn)展
        1.1.1 防御素的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 防御素的分類及分布
        1.1.3 β-防御素的結(jié)構(gòu)和表達(dá)調(diào)控
        1.1.4 β-防御素的作用
    1.2 綿羊瘤胃上皮結(jié)構(gòu)及上皮細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.1 綿羊瘤胃上皮結(jié)構(gòu)
        1.2.2 瘤胃上皮細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 益生菌
        1.3.1 益生菌的定義
        1.3.2 益生菌的分布及分類
        1.3.3 益生菌的生理功能
        1.3.4 植物乳桿菌的生物學(xué)特性和生理功能
    1.4 試驗(yàn)的目的和意義
2 試驗(yàn)部分
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 試驗(yàn)藥品
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 綿羊瘤胃上皮細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定
        2.2.2 綿羊瘤胃上皮細(xì)胞的特征鑒定
        2.2.3 植物乳桿菌的培養(yǎng)
        2.2.4 植物乳桿菌對(duì)綿羊上皮細(xì)胞β-防御素(SBD-1)基因表達(dá)的影
3 試驗(yàn)結(jié)果
    3.1 綿羊瘤胃上皮細(xì)胞培養(yǎng)
        3.1.1 綿羊瘤胃上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)
        3.1.2 綿羊瘤胃上皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)
        3.1.3 綿羊瘤胃上皮細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇
    3.2 綿羊上皮細(xì)胞的特征鑒定
        3.2.1 光學(xué)顯微鏡檢查
        3.2.2 瘤胃上皮傳代細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線
        3.2.3 免疫組化檢測(cè)
    3.3 植物乳桿菌的培養(yǎng)
    3.4 植物乳桿菌對(duì)綿羊上皮細(xì)胞β-防御素(SBD-1)基因表達(dá)的影響
        3.4.1 瘤胃上皮細(xì)胞總RNA的檢測(cè)結(jié)果
        3.4.2 熒光定量PCR檢測(cè)瘤胃上皮細(xì)胞SBD-1和β-actin基因mRNA的表達(dá)
4 討論
    4.1 綿羊瘤胃上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.1.1 綿羊瘤胃上皮細(xì)胞的原代及傳代培養(yǎng)
        4.1.2 綿羊瘤胃上皮細(xì)胞的鑒定
    4.2 植物乳桿菌的培養(yǎng)
    4.3 植物乳桿菌對(duì)SBD-1基因表達(dá)的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3881165