發(fā)布時(shí)間：2024-01-12 08:24

　　豬瘟（classical swine fever，CSF）是由黃病毒科瘟病毒屬的豬瘟病毒（classicalswine fever virus，CSFV）引起的一種重大傳染病，具有很高的死亡率，對(duì)我國(guó)生豬產(chǎn)業(yè)造成巨大的損害。CSFV是單股正鏈RNA病毒，基因組大小約為12.3kb，編碼一個(gè)大的多聚體蛋白，蛋白酶將其裂解成12種蛋白，包括8種非結(jié)構(gòu)蛋白（P7、Npro、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B）和4種結(jié)構(gòu)蛋白（囊膜糖蛋白Erns、衣殼蛋白C、E1、E2），其中，5′-UTR、3′-UTR、NS5B基因序列比較保守，而NS5B常用于CSFV基因分型。目前，我國(guó)豬瘟的防控主要采用豬瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）免疫，但是由于缺乏相應(yīng)的血清學(xué)標(biāo)志和配套的鑒別檢測(cè)方法，其在我國(guó)的大規(guī)模應(yīng)用，使得通過抗體檢測(cè)很難區(qū)分免疫弱毒和野毒感染，不利于豬瘟的凈化。 針對(duì)豬瘟病毒野毒感染與疫苗免疫鑒別診斷的關(guān)鍵問題，本研究參照GenBank中登錄的CSFV標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株（shimen、Alfort、Brescia等）、疫苗株（HCLV、Chinese C、Rimes等）、不同基因亞型的C...

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬瘟
        1.1.1 豬瘟的癥狀及危害
        1.1.2 中國(guó)豬瘟的流行特點(diǎn)與分子流行病學(xué)
        1.1.3 豬瘟防控存在的問題及防治措施
    1.2 豬瘟病毒
        1.2.1 豬瘟病毒的基本結(jié)構(gòu)
        1.2.2 豬瘟病毒基因組結(jié)構(gòu)及編碼的蛋白
        1.2.3 豬瘟病毒的檢測(cè)方法
    1.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增
        1.3.1 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增的原理
        1.3.2 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增的應(yīng)用
        1.3.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增的優(yōu)缺點(diǎn)
    1.4 研究意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 毒株與病料
        2.1.2 所用儀器設(shè)備
        2.1.3 所用試劑
        2.1.4 常用溶液的配制
    2.2 方法
        2.2.1 序列對(duì)比分析
        2.2.2 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.2.3 CSFV 的分離和培養(yǎng)
        2.2.4 病毒 RNA/DNA 的提取及 RT-PCR 鑒定
        2.2.5 豬瘟強(qiáng)毒株與弱毒疫苗株的 LAMP 檢測(cè)方法的優(yōu)化
        2.2.6 LAMP 擴(kuò)增產(chǎn)物的可視化及瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)方法
        2.2.7 LAMP 敏感性檢測(cè)
        2.2.8 LAMP 特異性檢測(cè)
        2.2.9 LAMP 重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)
        2.2.10 CSFV RT-LAMP 反應(yīng)
        2.2.11 RT-LAMP 檢測(cè)豬病料
        2.2.12 7500-fast 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀對(duì) LAMP 擴(kuò)增實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)
3 結(jié)果
    3.1 CSFV 接種 PK-15 細(xì)胞的培養(yǎng)
    3.2 CSFV 強(qiáng)毒株和疫苗株 RT-PCR 結(jié)果
    3.3 CSFV LAMP 反應(yīng)條件的確定
        3.3.1 LAMP 反應(yīng)溫度的確定
        3.3.2 LAMP 反應(yīng)時(shí)間的確定
    3.4 CSFV 強(qiáng)毒株和疫苗株的 LAMP 擴(kuò)增可視化及瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果
    3.5 LAMP 敏感性檢測(cè)
    3.6 LAMP 特異性檢測(cè)
    3.7 LAMP 重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)
    3.8 RT-LAMP 符合率檢測(cè)
    3.9 7500-fast 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀對(duì) LAMP 實(shí)時(shí)監(jiān)控
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄：英文縮寫一覽表
致謝
作者簡(jiǎn)歷
發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3877873