為制備新型鴨呼腸孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)群特異性抗原σB的多克隆抗體,研究采用RT-PCR方法擴增NDRV-SD19/6201株σB基因編碼序列,將其克隆至原核表達載體pET-32a(+)中,在大腸桿菌BL21(DE3)中進行誘導表達。SDS-PAGE和Western blot鑒定結果顯示,NDRV群特異性抗原σB獲得高效表達,重組蛋白分子量約55 ku,該重組蛋白具有良好的免疫活性,能與His-標簽抗體及NDRV陽性血清發(fā)生特異性結合反應。以純化的重組蛋白免疫新西蘭兔,獲得高效價多克隆抗體,效價1∶12 800以上;間接免疫熒光試驗表明,多克隆抗體能特異性識別多株NDRV毒株,具有較好的免疫反應活性。研究為建立NDRV血清學診斷方法提供了材料,同時為探究σB蛋白生物學功能奠定了基礎。

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