課題組前期開展的中國荷斯坦牛產(chǎn)奶性狀全基因組關(guān)聯(lián)分析利用傳遞不平衡(L1-TDT)和回歸分析(MMRA)兩種統(tǒng)計分析方法同時檢測到38個顯著SNP位點。本研究旨在基于該GWAS結(jié)果進一步篩選和鑒定奶牛產(chǎn)奶性狀關(guān)鍵基因并進行功能驗證。 (1)位置候選基因鑒定及功能注釋：基于�；蚪M序列草圖(Btau4.2),采用生物信息學(xué)和比較基因組學(xué)方法進行了上述38個顯著SNPs的位置候選基因篩查和功能預(yù)測,最終鑒定到24個位置候選基因并確定了其物理位置、基因類型及功能注釋；基于此,進一步從該24個位置候選基因中挑選了10個基因,利用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)進行了組織表達譜分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)EEF1D和PDE9A基因在泌乳期中國荷斯坦牛乳腺組織中的mRNA表達量均明顯高于其他7個組織(心肌,子宮,腎,肝,肺,卵巢和小腸)。結(jié)合前期GWAS結(jié)果,初步說明這2個基因與奶牛泌乳功能相關(guān),將之確定為奶牛產(chǎn)奶性狀候選基因,進行細(xì)胞水平功能驗證。 (2)EEF1D和PDE9A基因可變剪接鑒定：通過NCBI和UCSC數(shù)據(jù)庫檢索發(fā)現(xiàn)EEF1D和PDE9A基因的mRNA序列不完整并且多次改變,同時人和小鼠EEF1D和...

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 奶牛分子育種的主要技術(shù)和研究方向
    1.2 可變剪接
    1.3 乳腺上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)
    1.4 基因功能驗證
    1.5 本研究的目的和主要內(nèi)容
第二章 基于GWAS確定產(chǎn)奶性狀的候選基因
    2.1 試驗材料
    2.2 實驗方法
    2.3 結(jié)果與分析
    2.4 討論與結(jié)論
第三章 EEF1D和PDE9A基因的可變剪接研究
    3.1 試驗材料
    3.2 試驗方法
    3.3 結(jié)果與分析
    3.4 討論與結(jié)論
第四章 牛乳腺上皮原代細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
    4.1 試驗材料
    4.2 試驗方法
    4.3 結(jié)果與分析
    4.4 討論與結(jié)論
第五章 候選基因過表達和干擾載體的構(gòu)建
    5.1 材料與方法
    5.2 結(jié)果與分析
    5.3 討論與結(jié)論
第六章 總結(jié)和后續(xù)實驗計劃
    6.1 現(xiàn)有研究結(jié)果
    6.2 后續(xù)實驗計劃
參考文獻
致謝
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