鴨母源抗體能夠通過卵黃囊垂直傳播至剛孵化的雛鴨,發(fā)揮免疫應(yīng)答功能。其中IgY的含量最為豐富。我們推測鴨卵黃囊膜上存在能夠轉(zhuǎn)運IgY的受體。對哺乳動物FcRn和雞FcRy特性的研究,發(fā)現(xiàn)兩種受體結(jié)合抗體均具有pH依賴性,即在酸性條件下與抗體結(jié)合,中性或堿性條件下解離,籍此機制將母源抗體特異性轉(zhuǎn)運至新生動物體內(nèi)。而鴨IgY被轉(zhuǎn)運至雛鴨體內(nèi)的過程與此類似,但目前沒有關(guān)于鴨卵黃囊膜FcRy的相關(guān)報道,故對此展開研究。本研究的主要內(nèi)容如下： 1.鴨FcRy的分離純化 采用辛酸-硫酸銨法和水溶稀釋法,從鴨蛋黃中粗提卵黃IgY,純化獲得了鴨完整型IgY,其重鏈約67KDa,輕鏈約25KDa。進(jìn)一步制備鴨IgY-親和層析柱,通過調(diào)節(jié)不同pH值,從鴨卵黃囊膜分離純化獲得了鴨FcRy,其大小約為180KDa。 2.鴨FcRy全長基因的克隆與序列分析 從24-25日齡鴨胚中剝離卵黃囊膜,提取總RNA,經(jīng)過RT-PCR分5段擴增編碼鴨FcRy的基因片段,將5個目的基因片段分別連接至pMD18-T載體后測序,拼接獲得了鴨FcRy全長基因,大小為6293bp,與已報道的鴨磷脂酶A2受體基因核苷酸同源性為99%。 ...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 鴨卵黃抗體IgY的研究
        1.1.1 IgY的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 IgY的功能
        1.1.3 鴨IgY的粗提與純化
    1.2 哺乳動物新生兒Fc受體(FcRn)的研究
    1.3 雞卵黃囊膜IgY Fc受體(FcRy)的研究
        1.3.1 雞FcRy的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 雞FcRy的分離純化與克隆
        1.3.3 雞FcRy與IgY結(jié)合的特點
        1.3.4 雞FcRy的胞轉(zhuǎn)機制
2 研究目的及意義
3 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌株及細(xì)胞
        3.1.2 載體與質(zhì)粒
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 實驗動物
        3.1.5 試劑配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 分離純化鴨FcRy
        3.2.2 鴨FcRy全長基因的克隆
        3.2.3 FcRy-CF基因亞克隆
        3.2.4 原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.5 重組原核表達(dá)質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.6 融合蛋白的純化
        3.2.7 多克隆抗體的制備及純化
        3.2.8 Western blot檢測鴨各組織的分布
        3.2.9 免疫組化研究FcRy在鴨各組織中的分布
4 實驗結(jié)果
    4.1 從鴨卵黃囊膜上分離純化鴨FcRy
        4.1.1 鴨完整型IgY的粗提與純化
        4.1.2 分離純化鴨FcRy
    4.2 鴨FcRy基因的克隆與序列分析
        4.2.1 鴨FcRy全長基因分段克隆與序列分析
        4.2.2 鴨FcRy同源性分析
    4.3 FcRy-CF基因的亞克隆與序列分析
        4.3.1 FcRy-CF基因的亞克隆
        4.3.2 FcRy-CF基因的鑒定、測序及序列分析
    4.4 融合蛋白的原核表達(dá)與純化
    4.5 多克隆抗體的制備
        4.5.1 抗體效價的測定(間接ELISA法)
        4.5.2 Western blot檢測多克隆抗體特異性
    4.6 多克隆抗體的純化及鑒定
    4.7 Western blot方法檢測鴨FcRy在各組織中的表達(dá)
    4.8 SABC法檢測FcRy在鴨體內(nèi)的分布研究
        4.8.1 最佳反應(yīng)條件的確定
        4.8.2 FcRy在鴨體內(nèi)的分布情況
5 討論
    5.1 從鴨卵黃囊膜上分離純化得到鴨FcRy
    5.2 鴨FcRy基因的克隆與序列分析
    5.3 鴨FcRy-CF基因的亞克隆及表達(dá)
    5.4 兔抗鴨FcRy多克隆抗體的制備與純化
    5.5 免疫組織化學(xué)方法檢測鴨FcRy在鴨體內(nèi)的表達(dá)與分布情況
6. 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄1
附錄2
附錄3
附錄4
附錄5
附錄6
附錄7
致謝



本文編號：3871674