本研究對(duì)廣西的5個(gè)奶牛場(chǎng)的75份乳房炎奶樣進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定,并根據(jù)鑒定結(jié)果對(duì)無(wú)乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌4種主要的致病菌建立多重PCR快速診斷技術(shù)。并對(duì)該技術(shù)進(jìn)行體系優(yōu)化和檢測(cè)評(píng)價(jià),在此基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)研制出可用于臨床實(shí)際中牛奶及乳制品的目標(biāo)病原菌的快速檢測(cè)試劑盒。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和結(jié)果如下： 1.通過(guò)對(duì)廣西的5個(gè)大型奶牛場(chǎng)75份乳樣進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,75份乳樣中共檢出共135株病原菌微生物,其中金黃色葡萄球菌有24株,占17.87%；表皮葡萄球菌8株,占5.93%；腐生葡萄球菌5株,占3.70%；無(wú)乳鏈球菌17株,占12.59%；乳房鏈球菌9株,占6.67%;乳鏈球菌7株,占5.19%；停乳鏈球菌5株,占3.70%；糞鏈球菌5株,占3.70%；白色念珠菌12株,8.89%；酵母菌6株,占4.44%；大腸桿菌17株,占12.59%;沙門(mén)桿菌6株,占4.44%；福氏志賀桿菌2株,占1.48%；化膿棒狀桿菌2株,占1.48%;蠟樣芽孢桿菌10株,占7.42%。鑒定結(jié)果表明引起廣西地區(qū)奶牛乳房炎的主要致病菌是無(wú)乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌以及白色念珠...

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 奶牛乳房炎研究概述
    1.1 奶牛乳房炎的流行病學(xué)調(diào)查
    1.2 乳房炎的類(lèi)型
        1.2.1 根據(jù)臨床表現(xiàn)癥狀分
    1.3 奶牛乳房炎的發(fā)病因素
        1.3.1 根據(jù)病原菌分
        1.3.2 環(huán)境衛(wèi)生
        1.3.3 營(yíng)養(yǎng)因素
    1.4 奶牛乳房炎診斷和檢測(cè)方法研究進(jìn)展
        1.4.1 奶牛乳房炎的診斷
        1.4.2 分子生物學(xué)檢測(cè)方法
    1.5 多重PCR檢測(cè)方法的研究及應(yīng)用現(xiàn)狀
    1.6 PCR試劑盒研究現(xiàn)狀
    1.7 本課題的研究?jī)?nèi)容與意義
第二章 廣西地區(qū)奶牛乳房炎致病菌的分離鑒定
    2.1 材料與方法
        2.1.1 乳樣來(lái)源
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 培養(yǎng)基和試劑
    2.2 乳樣采集
    2.3 致病菌的分離鑒定及純化
        2.3.1 致病菌的鑒定
        2.3.2 生化鑒定
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果
        2.4.2 討論
第三章 奶牛乳房炎4重PCR檢測(cè)方法的建立及優(yōu)化
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 單重PCR體系的建立與結(jié)果分析
        3.2.2 單重PCR特異性結(jié)果
        3.2.3 單重PCR敏感性結(jié)果分析
        3.2.4 多重PCR體系的優(yōu)化結(jié)果
        3.2.5 多重PCR特異性結(jié)果
        3.2.6 4重PCR檢測(cè)臨床奶樣結(jié)果
    3.3 討論
        3.3.1 模板的制備
        3.3.2 引物的設(shè)計(jì)
        3.3.3 體系的優(yōu)化
        3.3.4 敏感性的結(jié)果分析
        3.3.5 多重PCR假陽(yáng)性分析
        3.3.6 假陽(yáng)性試驗(yàn)控制
        3.3.7 PCR反應(yīng)添加劑的分析
第四章 四重PCR快速檢測(cè)試劑盒的組裝、保存期試驗(yàn)及使用方法
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 試劑
        4.1.3 儀器
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
        4.1.5 試劑盒的使用方法
    4.2 結(jié)果與討論
        4.2.1 不同保存條件對(duì)試劑盒的影響
        4.2.2 檢測(cè)試劑盒保存期試驗(yàn)結(jié)果
        4.2.3 試劑盒臨床檢測(cè)結(jié)果
        4.2.4 討論
第五章 小結(jié)、創(chuàng)新點(diǎn)與展望
    5.1 研究小結(jié)
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄1 擴(kuò)增序列
附錄2 英文縮寫(xiě)詞表
附錄3 部分細(xì)菌分離圖
致謝
碩士期間發(fā)表論文及專(zhuān)利



本文編號(hào)：3865698